【摘 要】
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白藜芦醇(Resveratorl,简称Res)是一种重要的植物抗毒素,具有抗癌、抗炎症、心血管保护等多种保健功能.然而,在白藜芦醇在天然植物体内的含量非常低,用传统的提取方法白
【机 构】
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华南农业大学食品学院,广州 510640
【出 处】
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中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会
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白藜芦醇(Resveratorl,简称Res)是一种重要的植物抗毒素,具有抗癌、抗炎症、心血管保护等多种保健功能.然而,在白藜芦醇在天然植物体内的含量非常低,用传统的提取方法白藜芦醇成本很高,因此采用基因工程手段进行异源表达获取白藜芦醇是研究的热点.本研究利用PCR和RT-PCR技术从花生粤油45中克隆出白藜芦醇合酶基因的DNA和cDNA序列,并运用生物信息学的方法对其进行了序列分析；构建了含金针菇内源gpd启动子和白藜芦醇合酶基因(RS)基因的真核表达载体,并采用PEG介导法将该载体遗传转化金针菇原生质体.研究结果表明：(1)克隆得到的白藜芦醇合酶基因的全长DNA序列和全长cDNA序列,分别为1498bp和1251bp.该cDNA序列具有完整的开放性阅读框,编码389个氨基酸的多肽,相对分子量为42.8 kD,等电点为5.70,含有2个内含子.该白藜芦醇合酶氨基酸368～378位点上存在芪合酶家族的特征位点GVLFGFGPGLT.(2)构建的金针菇真核表达载体pgFvs-RS含金针菇内源性启动子gpd-Fvs 和白黎如醇合酶基因RS.(3)金针菇原生质体制备与再生体系为：液体培养5d的金针菇菌丝,以0.6 mol/L KCl作为稳渗剂,加入1.5％溶壁酶,在30℃下酶解金针菇菌丝3h时,分离得到的原生质体效果最佳,原生质体产量在2×107～1 × 108个/ml之间；采用预培养法,再生效果较好,在含有0.6 mol/L甘露醇的MYG培养基中,原生质体再生率达1.28％. (4)采用PEG介导法,将真核表达载体pgFvs-RS和pgFvs-hph共转化金针菇菌丝原生质体,经PCR鉴定及RT-PCR验证,有10株转化子的基因组DNA中整合了外源RS基因,其中2株转化子在mRNA水平上转录表达RS基因.
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