论文部分内容阅读
【目的】放射性肺纤维化的致死性严重影响了放疗的临床应用。我们前期研究表明,重要的免疫调节细胞——CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）参与放射性肺纤维化的发病。近年来的研究表明肺上皮细胞发生上皮间质转化（EMT）是放射性肺纤维化发病的重要机制。本研究观察Freg对辐射诱导肺EMT的影响,探讨EMT的重要介导蛋白——β-catenin在其中的作用;阐明Treg介导放射性肺纤维化的作用机制。【材料和方法:C57BL/6小鼠胸部20Gy60Coγ射线单次照射建立放射性肺纤维化模型,抗CD25抗体腹腔注射抑制Treg,肺组织HE及Masson三色染色观察肺组织纤维化改变,流式细胞染色观察肺内Treg,免疫组化/荧光染色及Western blot观察EMT重要表征蛋白及β-catenin表达;采用小鼠肺支气管上皮细胞系MLE12建立体外辐射诱导肺上皮细胞EMT模型,与Treg共培养,采用流式检测EMT发生,Western blot观察β-catenin表达,采用siRNA抑制MLE12中β-catenin的表达,观察β-catenin在Treg促进辐射诱导EMT中的作用。【结果】流式细胞检测结果显示,肺Treg从照后14天起持续升高,注射抗CD25抗体后肺内Treg受到抑制;肺HE结果显示,照射后1个月起随时间延长纤维化症状逐渐加重,Masson三色染色显示,照射后1个月起小鼠肺间质胶原沉积增加;而Freg抑制后,受照小鼠肺组织肺泡结构破坏减少,肺间质胶原沉积减轻;免疫荧光显示肺泡上皮细胞间质标志——N-钙粘素表达增加,上皮标志物——表面蛋白C逐渐丢失,抑制Treg后,EMT减弱。免疫组化结果显示,β-catenin在肺组织上皮细胞胞浆和胞核中表达增加,抑制Freg后,β-catenin表达降低。体外结果显示,MLE12经6Gyγ射线照射后48h,EMT发生率显着增高。Western blot结果表明在共培养条件下,MLE12中β-catenin的表达高于MLE12单独培养情况。采用siRNA下调MLE12细胞β-catenin后,Treg诱导MLE12发生EMT的比例下降。【结论】Treg促进放射性纤维化中EMT的发生,是Treg调节放射性肺纤维化发生发展的重要机制。