【摘 要】
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目的:构建ω-3多不饱和脂防酸(ω-3PUFA)可调控的跨膜型肿瘤坏死因子α(tmTNFα)真核表达载体，初步探讨两者联合作用其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。 方法:设计并合成包含
【机 构】
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第三军医大学营养与食品卫生学教研室,重庆 400038
【出 处】
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首届中西部营养与健康、亚健康学术会议
论文部分内容阅读
目的:构建ω-3多不饱和脂防酸(ω-3PUFA)可调控的跨膜型肿瘤坏死因子α(tmTNFα)真核表达载体，初步探讨两者联合作用其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。
方法:设计并合成包含过氧化物酶体增殖物反应元件(PPRE)的tk启动子序列，与人突变型tmTNFα真核表达载体pcDNA3-TNF(△1-12)WT重组，构建pPPRE-tmTNF α表达载体，应用酶切-电泳分析和测序鉴定载体重组效果;以脂质体转染技术转染人白血病HL-60细胞和乳腺癌MCF-7细胞，经ω-3PUFA处理后，应用RT-PCR和免疫荧光技术检测tmTNF α蛋白表达变化。生长曲线、流式细胞分析检测ω-3PUFA对转染细胞增殖能力和凋亡的影响。
结果:经琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定证明pPPRE-tmTNF α真核表达载体构建成功，转染此重组表达载体的HL-60tmTNFα和MCF-7tmTNFα细胞tmTNF α的稳定表达于细胞膜，在ω-3PUFA诱导下表达显著增加，两者之间呈一定的时间、剂量一效应关系。HL-60和MCF-7细胞经6．0×10-5mol／Lω-3PUFA (EPA或DHA)处理后增殖能力均明显减弱，同时可以发现HL-60细胞周期阻滞于G0／G1期，凋亡率增加，但是ω-3PUFA对MCF-7细胞周期及凋亡未见明显影响。HL-60tmTNFα期胞经ω-3PUFA处理后上述变化更为显著，其第三天抑制率分别达到37．6％和31．3％，而ω-3PUFA不仅可以更为显著的抑制MCF-7tmTNFα细胞增殖，而且可以检测到凋亡率的增加。
结论:成功构建受ω-3 PUFA 正调控的tmTNF α真核表达载体，在ω-3PUFA诱导下转染细胞可以高效表达外源性跨膜型TNF α基因产物，可以增强ω-3PUFA的抗肿瘤能力，而诱导细胞凋亡可能是其中重要作用方式之一。
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