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目的本实验是为了建立和验证苏州药明康德新药开发股份有限公司遗传毒理实验室开展小鼠淋巴瘤TK基因突变实验的能力。方法本实验室选用微孔板法。实验用小鼠淋巴瘤细胞株L5178Y TK+/--3.7.2C来源于ATCC,CRL 9518,细胞生长在含10%灭活马血清RPMI 1640培养基中,并在条件为37℃±1℃C和4%8%CO2的CO2培养箱中培养。实验包括三个给药处理系列,剂量筛选实验后,主实验剂量为3h+S9（0.025,0.05,0.1,0.25,0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.6和4.5μg/mL）、3h-S9（1,3,7,15,30,60,130和279.1μg/mL）和24h-S9（1,3,7,15,30,60,130和279.1μg/mL）,每一系列设立平行的溶剂和阳性对照,给药处理用含5%灭活马血清RPMI 1640培养基。3h+S9和3h-S9两个系列为10mL体系,给药处理细胞终浓度为6.0×105/mL,处理结束后用不含血清的基础培养基洗两次,用20mL含10%灭活马血清RPMI 1640培养基重悬,进行两天的表达期培养。24h-S9系列20mL体系,给药细胞终浓度为3.0×105/mL,,处理结束后用不含血清的基础培养基洗两次,测定细胞密度,并用含10%灭活马血清RPMI 1640培养基调整为3.0×105/mL,进行两天的表达期培养。在表达期间,每天计数细胞密度,并调整为3.0×105/mL。表达结束后,用含20%灭活马血清RPMI 1640培养基将细胞梯度稀释为8/mL,接种96孔板,每份细胞接种2块,培养10-14天后,计数每块平板有集落生长的孔数,用来测定平板克隆效率;将细胞密度调整为1×104/mL,,并添加三氟胸苷（TFT）使其终浓度为3μg/mL,接种96孔板,每份细胞接种4块,培养10-14天后,计数有突变集落生长的孔数,用来测定抗性突变频率。并按照MLA标准操作规程计算悬浮增长率（SG）,相对总增长率（RTG）,克隆效率（CE）,突变频率（MF）,小集落突变频率（SMF）,诱导突变频率（IMF）,诱导小集落突变频率（ISMF）和小集落突变百分比（SC%）。结果本实验突变频率MF,平板克隆效率CE,悬浮增长率SG,阳性对照结果以及实验可接受的最高浓度和可用于评价的剂量均满足实验接受标准。环磷酰胺在给药3h活化条件下,剂量为0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.6（RTG为10.6%）和4.5μg/mL（RTG为5.1%）诱导的MF超出通用评价因子（GEF）126,并呈现剂量效应关系。环磷酰胺在非代谢活化条件的3h和24h两个系列中,各剂量诱导的MF均未超过126,且未表现出明显的细胞毒性。结论本次小鼠淋巴瘤TK基因突变实验是有效的,磷酰胺在代谢活化条件下具备诱导L5178YTK+/--3.7.2C细胞TK基因突变的能力,以上实验结果与文献报道的环磷酰胺小鼠淋巴瘤实验结果相一致（Mitchell等,1997）,小鼠淋巴瘤TK基因突变实验在苏州药明康德遗传毒理实验室得到了验证。