【摘 要】
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目的：研究人羊膜上皮细胞体外培养和扩增,及其向角膜上皮细胞诱导分化的可能性.方法：取足月顺产人胎盘,钝性剥离羊膜,经0.05％胰蛋白酶+0.02％EDTA消化后,获取的羊膜上皮细胞接
【出 处】
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第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会
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目的：研究人羊膜上皮细胞体外培养和扩增,及其向角膜上皮细胞诱导分化的可能性.方法：取足月顺产人胎盘,钝性剥离羊膜,经0.05％胰蛋白酶+0.02％EDTA消化后,获取的羊膜上皮细胞接种于DMEM/F 12培养基(10％胎牛血清,人重组表皮生长因子10ng/ml,青链霉素50IU/ml)中进行原代和传代培养,并通过免疫组化方法测定细胞角蛋白3、18、19的表达情况,对人羊膜上皮细胞进行鉴定.取新西兰大白兔角膜,应用全角膜组织块培养法培养角膜细胞,取原代角膜细胞和第2、3代人羊膜上皮细胞共同接种于transwell小室内进行培养,观察人羊膜上皮细胞形态变化,通过流式细胞仪检测诱导前、诱导后细胞角蛋白3的表达量,并通过扫描电镜观察诱导前、后细胞形态及结构的变化.结果：人羊膜上皮细胞可以在体外成功的培养、传代,体外可连续传4～5代.体外培养细胞呈多角形、不规则形,铺路石样表现.细胞角蛋白3、18、1 9多克隆抗体染色阳性.流式细胞仪检测CK3、CK18、CK19表达量分别为40.84±0.2％,47.51±0.3％,和32.41±0.2％.经诱导培养后的人羊膜上皮细胞呈扁平状,流式细胞学检测细胞角蛋白3表达量为76.40±0.3％,经统计学处理,有统计学意义.结论：人羊膜上皮细胞在体外可成功进行原代、传代培养,并维持增殖能力.人羊膜上皮细胞可被角膜细胞诱导分化为角膜上皮细胞.
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