目的 邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)是常见的增塑剂之一,广泛分布于环境中,DEHP属于环境内分泌干扰物,具有明显的生殖毒性.本文应用分子克隆技术构建3β-HSD基因高表达载体,建立3β-HSD高表达细胞株,研究3β-HSD高表达对DEHP致凋亡的影响.方法 根据GenBank提供的3β-HSD基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒栽体pLVX-CMV-ZSgreen-PGK-Puro中；将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染MCF-7细胞；用嘌呤霉素筛选得到3β-HSD高表达稳定细胞株,通过基因测序、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和western blot对细胞株进行鉴定.分别采用浓度为0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L的DEHP对MCF-7细胞和3β-HSD高表达细胞染毒24 h,同时设置二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组(即DEHP 0 mmol/L染毒剂量组),检测凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-8在基因和蛋白表达水平的变化.结果 经基因测序验证,本文构建的3β-HSD基因高表达载体基因序列与GenBank中的序列一致；荧光定量PCR检测显示3β-HSD高表达细胞的3β-HSD基因表达水平比正常MCF-7细胞升高105倍；western blot检测显示3β-HSD高表达细胞的3β-HSD蛋白表达水平比正常MCF-7细胞升高80％.不同剂量DEHP染毒3β-HSD高表达细胞与MCF-7细胞后,qRT-PCR结果显示,MCF-7细胞中Bax基因表达水平比对照组(0mmol/L DEHP)升高28％ ～54％,Caspase-3基因表达水平升高13％～49％,Caspase-8基因表达升高21％～70％.与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较,3β-HSD高表达细胞中Bax基因表达水平升高39％～75％,Caspase-3基因表达升高22％～30％,Caspase-8基因表达升高32％～45％.Western blot实验显示,MCF-7细胞中BAX蛋白表达水平比对照组升高28％～61％,CASPASE-3蛋白表达升高40％～48％,CASPASE-8蛋白表达升高31％～84％.与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较,3β-HSD高表达细胞BAX蛋白表达水平升高8％～33％, CASPASE-3蛋白表达升高19％～32％,CASPASE-8蛋白表达升高10％～21％.结论 本文成功构建3β-HSD基因高表达细胞林；DEHP可引起MCF-7细胞和3β-HSD高表达细胞凋亡基因及蛋白发生明显改变,提示3β-HSD基因是参与调控DEHP内分泌干扰作用的重要因素,3β-HSD基因与DEHP毒性存在一定关系.