【摘 要】
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目的:通过体外试验检测阿司匹林丁香酚酯（AEE）对脂肪酶活性的抑制作用,为阐释AEE降血脂作用机理提供理论依据。方法:方法一以对硝基苯酚棕榈酸酯/丁酸酯为底物,在50 mMTris-HCl
【机 构】
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中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室;
【基金项目】
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中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2014-LIHPS-02);国家自然科学基金青年基金项目(项目编号:31402254)
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目的:通过体外试验检测阿司匹林丁香酚酯（AEE）对脂肪酶活性的抑制作用,为阐释AEE降血脂作用机理提供理论依据。方法:方法一以对硝基苯酚棕榈酸酯/丁酸酯为底物,在50 mMTris-HCl（pH 8.0）缓冲液中,37℃反应20min,以10%三氯乙酸和10%Na2CO3终止反应,于410nm测定光吸收值,检测AEE对猪胰脂肪酶活性的抑制作用。方法二采用人单酰甘油脂肪酶抑制剂筛选试剂盒法,以4-硝基苯酚乙酸酯为底物,在10 mMTris-HCl （pH 7.2）缓冲液中,室温下静置10 min,于410 nm测定光吸收值,测定AEE抑制人单酰甘油脂肪酶（MAGL）活性的最佳浓度,检测不同药物对MAGL的抑制率,判定AEE对MAGL的抑制类型。结果:采用方法一经过反复试验,结果显示该方法测定结果数值不稳定,与理论结果相矛盾,表明该方法用于测定AEE对脂肪酶活性抑制作用不可行。方法二试验结果显示,371.51μM的AEE溶液为最佳检测浓度,阳性对照JZL195对MAGL的抑制率为83～85%。各试验药物对MAGL的抑制率为AEE （17.8～18.1%）,水杨酸（13.2～13.6%）,丁香酚（12.5～13.0%）,水杨酸-丁香酚（摩尔浓度1:1）（11.0～11.4%）,辛伐他汀（10.1～10.5%）,阿司匹林（9.0～9.6%）,奥利司他（3.4～4.1%）。做双倒数图,描绘出米曼式方程,判断JZL195和AEE对MAGL的抑制类型为反竞争性抑制作用。结论:方法二试验结果数值稳定、可靠。试验结果验证了AEE对MAGL酶活性的抑制率高于其他对照药物,但明显低于阳性对照JZL195。
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