【摘 要】
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目的:本研究旨在建立快速、灵敏、特异性强的方法以检测宿主细胞中的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis vrrus,REV),并对其在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的增殖动态
【机 构】
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教育部禽类预防医学省部共建重点实验室,扬州225009
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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目的:本研究旨在建立快速、灵敏、特异性强的方法以检测宿主细胞中的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis vrrus,REV),并对其在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的增殖动态规律进行初步研究.
方法:本研究针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计三对引物,利用重组质粒作为模板,完成三种不同基因的标准曲线绘制,以此建立了SYBR GreenI实时荧光PCR检测方法并利用该方法推算出REV感染后不同时间点的病毒基因拷贝数.
结果:所制备的标准品模板在108拷贝/μl-101拷贝/μl范围内与CT值之间呈现良好的线性关系,且最低检出量为101拷贝/μl.实验结果显示,gag、env以及LTR基因的拷贝数均呈现先减少后增多的变化过程.
结论:通过实时荧光PCR技术,并与间接免疫荧光方法(IFA)相比较,发现REV在CEF上复制的初始阶段受到抑制,此后病毒大量复制,表现出明显的增长趋势.该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法,同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础.
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