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目的 随着敲除α-1,3半乳糖基转移酶基因猪的诞生(GTKO),异种移植引起的超急性免疫排斥反应已基本解决.然而,猪主要组织相容性复合体(Swine leukocyte antigens,SLA)作为异种抗原的存在,仍是制约异种移植发展的主要障碍之一.目的 本研究对连续3代共35头GTKO五指山小型猪的SLA单倍型进行分析,并探究了SLA单倍型类型与异种免疫排斥强弱的相关性,为异种器官移植研究供体的选择提供依据.方法 采集6头祖代GTKO五指山小型猪耳组织,利用RT-PCR对SLA Ⅰ类基因(SLA-1、SLA-3、SLA-2)和SLAⅡ类基因(SLA-DRB1、SLA-DQB1)基因座扩增、克隆及测序,获得GTKO五指山小型猪SLA经典Ⅰ类以及SLA Ⅱ类5个基因的完整CDs区序列,经BLAST分析,同时依据紧密连锁遗传规律,连续追踪3代35头猪,完成GTKO五指山小型猪SLA单倍型分型.选择群体中不同单倍型的个体,分离外周血单核细胞PBMC,与人灭活的血清进行补体依赖的细胞毒试验CDC,流式细胞术检测细胞死亡率.结果 测序分析共获得6条等位基因序列,其中4条为已公布的等位基因(SLA-1*0703、SLA-2* 1102、SLA-3*0401、SLA-3*0403),2条为新等位基因(SLA-1*0401wz01、SLA-2*1 1wz01).本研究群体中新发现了3个SLA Ⅰ类和2个SLAⅡ类单倍型,被ISAG命名委员会依次命名为：Hp-75.00(SLA-1*040 1wz01,SLA-3*0403,SLA-2* 1wz01)；Hp-76b.00(SLA-1*0703,SLA-3*0401,SLA-2* 1wz01)；Hp-76a.00(SLA-1*0703, SLA-3*0401, SLA-2*1102)；Hp-00.27 (SLA-DRB1*0901, SLA-DQB1*0901)；Hp-00.41(SLA-DRB 1*0401,SLA-DQB 1*0501).杂合单倍型Hp-75a.27/ 76a.41个体和纯合单倍型Hp-76a.41/ 76a.41、Hp-75.27/75.27个体PBMC分别与灭活的人、猴血清反应.人血清与不同单倍型PBMC反应后,细胞死亡率差异显著(P＜0.05),杂合单倍型Hp-75a.27/76a.41、纯合单倍型Hp-76a.41/76a.41细胞死亡率明显高于纯合单倍型Hp-75.27/75.27.然而,猴血清与不同单倍型PBMC反应后差异不显著.结论 本研究系统地完成了GTKO五指山小型猪封闭群SLA Ⅰ类以及SLA Ⅱ类单倍型分型,获得Hp-76a.41、Hp-75.27两种纯合单倍型家系.体外初步研究发现Hp-75.27/75.27纯合单倍型GTKO五指山小型猪PBMC与人血清反应后细胞死亡率相对较低.