玉米大斑病菌分生孢子产生条件的分析及产孢机制初探

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玉米大斑病(Northern Leaf Blight of Corn)是由大斑刚毛座腔菌(Setosphaeria turcica)引起的一种威胁玉米生产的重要叶部病害。分生孢子是子囊菌、半知菌及担子菌的无性孢子,具有抵抗高温、低温、干燥和营养缺乏等不良环境的能力,同时也是真菌病害的重要传播媒介。在基因功能研究中也常作为转化起始材料用于突变体的创制。因此,分生孢子产生的数量、活力对遗传转化的效率至关重要。本研究以玉米大斑病菌野生型菌株01-23为试材,探索了不同的培养基、温度、培养基pH、碳源、氮源、光照等条件对分生孢子产生的影响。试验结果表明,在培养基中添加玉米茎秆、玉米叶片时对分生孢子的产生有促进作用,玉米叶片葡萄糖琼脂培养基中分生孢子产量最高;在不同温度条件下,发现25℃时产孢量最多,4℃、10℃、15℃时不产孢,30℃时产孢量极少,温度对分生孢子产生的影响较为显著;不同pH值条件下,分生孢子在pH值为8时产孢量最高,pH值为4时分生孢子产量明显低于其他研究条件,说明弱碱性环境更有利于分生孢子的产生;分别利用不同碳源等量替换LCA培养基中乳糖时,发现分生孢子的产量均有不同程度的减少,而乳糖为碳源时产孢量最高;在LCA培养基中添加0.5%的不同氮源,研究发现添加KNO3时更有利于分生孢子的产生;不同光照条件下,12h光照12h黑暗交替培养时产孢量高于24h全黑暗和24h全光照两种培养条件,且其最佳光照强度为6 000lx。进一步利用Real-time PCR技术分析菌丝生长阶段及分生孢子产生阶段GATA家族5个基因的相对表达量情况,结果表明,与菌丝时期相比分生孢子时期StGATA2基因表达明显上调,StGATA3、StGATA4、StGATA5三个基因相对表达量均明显下调,其中,StGATA4下调最为显著,因此,初步推测StGATA2对分生孢子的产生具有正调节作用,StGATA3、StGATA4、StGATA5对分生孢子的产生具有负调控作用。本研究不仅明确了玉米大斑病菌分生孢子产生的因素、确定了GATA家族参与调控分生孢子产生,为进一步确定病菌分生孢子产生最佳条件及产孢机制奠定基础。
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