辅助生殖技术及自然妊娠绒毛中印记基因SNRPN甲基化状态的研究

来源 :广东省医学会第一次生殖医学学术会议暨广东省医学会生殖医学分会成立大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiwa99
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  目的 采用焦磷酸测序技术(Pyrosequencing),对ART妊娠早孕绒毛及停育绒毛中印记基因SNRPN的甲基化状态进行定量分析,以自然受孕早孕绒毛及停育绒毛为对照,探讨辅助生殖技术对印记基因SNRPN甲基化状态的影响,及印记基因SNRPN甲基化状态与早期妊娠胚胎发育的关系.方法 2008年5月至2011年4月于南方医院妇产科门诊收集ART自然停育绒毛31例;自然受孕早期停育绒毛33例;自然受孕早孕绒毛标本40例;同期于南方医院生殖医学中心收集ART早孕减胎绒毛46例.将绒毛标本清洗处理、DNA提取、基因组DNA重亚硫酸修饰后行SNRPN基因PCR扩增,扩增产物行焦磷酸测序,并得出每份标本的甲基化值.采用SPSS13.0软件统计测序数据,测序数据采用均数±标准差(X±S),各组间数量资料比较采用Welch近似方差分析;应用ROC曲线评价甲基化程度对自然流产发生的预测价值.设双侧检验,P< 0.05为差异有统计学意义.结果 所有绒毛标本的重亚硫酸盐修饰转化效率波动范围为90.1-100%,SNRPN基因的甲基化程度波动于29.9-61.2%之间,未出现完全甲基化(100%)或完全非甲基化(0%).四组间的SNRPN甲基化程度存在统计学差异(P=0.002),自然停育及ART停育组绒毛SNRPN基因甲基化值显著性高于自然早孕组.但是不同受精方式(IVF vs.ICSI)来源的绒毛组织之间SNRPN基因甲基化值不存在显著性差异(P> 0.05).将所有标本分为自然流产与正常早孕两组,绘制SNRPN基因甲基化值与自然流产关系的ROC曲线.ROC曲线下面积为0.633(95%可信区间0.541-0.725),曲线下面积标准误为0.047,P=0.005,提示绒毛组织中SNRPN基因甲基化程度与自然流产发生的风险呈正相关关系,但敏感度及特异度较低,提示SNRPN甲基化程度对早期自然流产的预测价值有限.结论 辅助生殖技术并未增加印记基因SNRPN异常甲基化状态的发生,可能不会增加与SNRPN甲基化状态异常有关疾病的发病风险;而SNRPN甲基化状态异常可能与早期妊娠胚胎停止发育有关,且甲基化程度越高发生自然流产的几率可能越大,提示表观遗传学的异常也可能是导致胚胎停育的重要因素之一.
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