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目的:通过TGF-β1诱导乳腺癌细胞发生的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),研究EMT能否使肿瘤干细胞相关标志物的表达发生变化,并讨论其意义。方法:将人乳腺癌细胞株MCF-7置于37℃,饱和湿度5%CO2,含10%胎牛血清RPMI-1640培养基中进行常规培养,待细胞进入对数生长期后用于实验。实验分两组,实验组MCF-7细胞培养时入TGF-β1,使其浓度达到10ng/ml,对照组加入等量PBS液。1.TGF-β1诱导培养MCF-7细胞发生EMT的形态学观察:将TGF-β1作用于MCF-7细胞株,在倒置相差显微镜下定时观察细胞的形态变化。2.细胞增殖实验(MTT法)检测TGF-β1对细胞增殖的影响。3.应用24孔Transwell侵袭小室进行MCF-7细胞的侵袭试验,检测TGF-β1对MCF-7细胞株侵袭能力的影响。应用细胞划痕实验检测TGF-β1对MCF-7细胞株迁移能力的影响。4.RT-PCR检测TGF-β1处理72h后细胞中干细胞相关标记物Oct4基因和EMT相关标记物E-cadherin基因、N-cadherin基因的表达情况。Western blot检测TGF-β1处理后细胞中干细胞相关标记物Oct4蛋白和EMT相关标记物Ecadherin蛋白、N-cadherin蛋白的表达情况。5.流式细胞术检测TGF-β1处理5d后MCF-7细胞中CD44~+CD24~-细胞亚群的比例。6.应用SPSS13.0统计软件进行分析。结果:1.倒置显微镜下观察MCF-7细胞的形态学变化结果:观察发现,TGF-β1刺激72h后,MCF-7细胞发生了表型改变,细胞呈纺锤形,细胞间连接减弱,部分细胞伸出伪足,细胞排列不规则。亲代MCF-7细胞呈现出典型的上皮细胞形态,连接紧密,成团生长。2.MTT实验检测结果:TGF-β1对乳腺癌细胞MCF-7生长增殖无显著影响。TGF-β1对乳腺癌细胞MCF-7生长促进作用不明显,对照组和实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。3.细胞侵袭实验、细胞划痕实验结果:Transwell侵袭小室培养细胞48h后,显微镜下观察MCF-7细胞穿过基底膜细胞数:对照组,TGF-β1(10ng/ml)组分别为(200±10)、(84±9)个/高倍视野(×100)。经TGF-β1处理的MCF-7细胞穿过Transwell小室的细胞数明显多于对照组(P<0.05)。细胞划痕实验显示TGF-β1处理过的MCF-7细胞迁移能力更强,差距有统计学意义(P<0.05)。4.RT-PCR、蛋白印记检测结果:RT-PCR、蛋白印记分析结果显示,与对照组MCF-7细胞相比,经TGF-β1处理过的MCF-7细胞中干细胞相关标记物Oct4和EMT相关标记物N-cadherin的基因和蛋白表达水平均显著提高。而EMT相关标记物E-cadherin的表达与此相反(P<0.05)。5.流式细胞术检测结果:流式细胞术检测结果显示,经TGF-β1作用后乳腺癌细胞MCF-7中CD44~+CD24~-亚群的细胞比例明显增加(P<0.05)。说明经TGF-β1作用后,乳腺癌细胞中干细胞比例有所增加。结论:1.TGF-β1对癌乳腺癌细胞株MCF-7生长增殖无显著影响。2.TGF-β1可以诱导MCF-7细胞向间充质细胞形态转化,促进EMT的发生,上调干细胞标志物Oct4、间质细胞标志物N-cadherin的基因及蛋白表达水平,而下调上皮细胞标志物E-cadherin的基因及蛋白表达水平,侵袭转移能力增强。TGF-β1诱导乳腺癌细胞发生EMT能够增加干细胞比例。