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目的:三氯乙烯(TCE)是一种在工业生产中被广泛使用的职业毒物,同时也是常见的环境污染物之一,其暴露能导致严重的肝毒性.我们前期发现SET蛋白是TCE肝细胞毒性中的关键因子,本研究在此基础上进一步探索SET介导的肝细胞毒性作用机制.方法:以正常肝细胞和SET稳定干扰肝细胞为受试细胞,8.0 mmol/L TCE分别处理24h后收集细胞,采用iTRAQ标记、IMAC富集联合LC-ESI-MS的策略筛选TCE致肝细胞毒性中SET介导的磷酸化蛋白.利用Phos-Tag联合Western-blot技术验证nucleolin(NCL)磷酸化及其表达水平变化,Co-IP分析NCL与c-myc结合的改变.进一步通过慢病毒介导的siRNA干扰技术构建NCL稳定干扰的L-02细胞,使用PI/AnnexinV双染、流式细胞术检测细胞凋亡并同时检测caspase3活性.结果:磷酸化蛋白质组学结果显示NCL是TCE致肝细胞毒作用中一个关键的SET介导的磷酸化蛋白.进一步的功能研究发现在TCE暴露的肝细胞中,NCL去磷酸化可抑制其与转录因子c-myc的结合从而诱导NCL自身表达上调.凋亡分析发现NCL表达被抑制时可缓解TCE暴露下SET介导的肝细胞毒性.结论:在TCE暴露下,SET通过抑制nucleolin磷酸化修饰诱导其表达上调,从而进一步介导了肝细胞毒性,为揭示TCE的肝毒性机制提供了新的线索.