【摘 要】
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论文目的：建立多重数字PCR体系检测外周血游离DNA(cfDNA)中KRAS第2外显子12、13密码子突变情况.论文方法：构建7种KRAS突变型质粒用以建立多重数字PCR检测体系.以灵敏度、特异度和线性等为主要参数评估体系的检测性能.检测4例胰腺导管腺癌患者(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)cfDNA中KRAS的突变情况,并与组织中ARMs检测的结果进行
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论文目的：建立多重数字PCR体系检测外周血游离DNA(cfDNA)中KRAS第2外显子12、13密码子突变情况.论文方法：构建7种KRAS突变型质粒用以建立多重数字PCR检测体系.以灵敏度、特异度和线性等为主要参数评估体系的检测性能.检测4例胰腺导管腺癌患者(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)cfDNA中KRAS的突变情况,并与组织中ARMs检测的结果进行比对.论文结果：自建的多重数字PCR具备良好的线性检测能力(MUT/WT：0.01％-10％),且最低可在21606个野生型中发现一个突变型拷贝(MUT/WT=0.0046％).四名PDAC患者中,两名PDAC患者中cfDNA的检测结果与组织的结果一致,另外两名患者的cfDNA中包含其他突变类型(PKRAS-3：G12D 0.79％, G12V 2.21％；PKRAS-4：G12D 3.25％,G13D 1.48％, G12S 1.78％).使用双重数字PCR对PKRAS-3,4的组织标本进行测试,结果显示ARMs的敏感度要低于数字PCR.论文结论：多重数字PCR具备极高的灵敏度和特异性,可用于准确定量外周血游离DNA中KRAS相关突变的水平.液体活检在数字PCR的帮助下具有广泛的应用前景.
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