猴B病毒gB基因杆状病毒表达载体的构建

来源 :中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:scratch2000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
根据B病毒E2490株(登录号AF533768)人工合成猴B病毒gB基因,通过XbaI和EcoRI特异性酶切,将其亚克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切及测序鉴定。表明构建了猴B病毒gB基因杆状病毒表达重组质粒pFastHTA-gB。在此基础上,重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经平板抗性筛选,PcR鉴定,表明获得了转座的杆粒,为下一步进行昆虫细胞的转染和以猴B病毒gB蛋白为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。
其他文献
弓形虫病是一种呈世界性分布,且严重危害人类健康与畜牧业的人兽共患性寄生虫病,本文介绍了于1990年代开始即试用弓形虫速殖子膜抗原,以间接酶联免疫吸附试验检测猪血清弓形虫特异性IgG抗体,取得了较满意的结果。
东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因,以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针,筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定,获得了19条EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性
东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因,探索其分子机理,我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织/器官裂解物共培养,比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果,之后,以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44d)噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选后,随机挑取92个噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析,获得了19个有效EST序列,其中15条FST序列与已
溶血毒素是一种胞外毒素,是金葡菌主要毒力因子之一。据报道,金葡菌人源菌株多数产a-溶血素,而从动物分离的菌株中常见β-溶血素,但是引起奶牛乳腺炎的金葡菌中α、β型未见相关报道,本试验根据GenBank公布的α和β溶血素序列,设计双重PCR引物,以我们在山东省内20多个规模化奶牛场乳腺炎病例中分离得到的金葡菌为模板,检测奶牛乳腺炎金葡菌溶血型,为研制奶牛乳腺炎金葡菌基因工程疫苗提供科学的依据。
以鸡源鲍氏志贺菌为研究对象,分别根据G-enBank中登陆的相应序列针对八个管家基因thrB/th,trpC/trpB,purM/purN,mdh/R设计8对引物,用鸡源鲍氏志贺菌基因组DNA为模板,分别扩增出八个目的基因,并克隆到PMD18-T vector中,进一步进行了序列测定。序列测定结果已经登陆C-enBank(按照上述顺序登陆号分别为:DQ995264,DQ995265,DQ99526
目的:研制检测LM的胶体金试纸。方法:原核表达ActA蛋白并进行亲合层析纯化;检测表达蛋白ActA的免疫原性;以表达的蛋白为检测抗原研制LM单克隆抗体;利用所制备的单抗建立检测LM的胶体金试纸方法,并对试纸的特异性、敏感性及模拟样品进行试验。结果:在大肠杆菌中表达了ActA蛋白,纯化蛋白的纯度在90%以上;表达蛋白诱导了特异性的细胞免疫和体液免疫,具有良好的免疫原性;获得了4株抗ActA单抗;研制
WhoA基因编码光滑型布氏杆菌脂多糖(LPS)O-侧链合成必须的糖基转移酶,该基因的缺失或破坏会影响布氏扦菌光滑型表型的形成。本研究以猪源光滑型布氏杆菌S2株为研究对象,通过同源重组将氯霉素抗性基因(Omr)完全替代S2株的WhoA基因,获得重组粗糙型布氏杆菌rS2-WboA株。rS2-WboA株在适宜的培养基(TSA)上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×107 CFU rS2-WboA免疫B
为探讨猪链球菌2型(Streptococcus suis typc2,SS2)次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)的生物学特性及其致病的相关性,选用自杀性质粒,通过同源重组成功构建具有氯霉素基因缺失株IMPDHm。PCR鉴定,IMPDH基因被cat基因表达盒所代替;Western blot鉴定,IMPDH单抗没有检测到相应的IMPDH蛋白。IMPDHm培养特性和致病性发生较明显的变化,其利用糖的能力
本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.9%~82.9%和89.5%~91.2%,而相应的鹅细小病毒间的同源性为93.7%~99.8%和96.8%~99.7%,番鸭细小病毒间的同源性为
利用MDBK细胞从临床表现典型口疮症状的病羊痂皮材料中分离获得1株病毒,通过形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等对该株病毒进行系统的分离鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Off virus,ORFV),命名为ORFV-sy。参照Genbank中羊传染性脓疱病毒的B2L、F1L基因的核苷酸序列,设计合成特异性引物,成功地对ORFV-sy株的B2L和F1L基因进行克隆、测序,并推导出其相应