【摘 要】
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目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和功能的影响.方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据刺激因子(CD3mAb、CD28mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)加入方法不同将实验分为7组.用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力;流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4, CD8, CD28, CD1
【机 构】
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中国人民解放军九七医院中心实验室,江苏徐州 221004 中国人民解放军九七医院消化内科,江苏徐州
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目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和功能的影响.
方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据刺激因子(CD3mAb、CD28mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)加入方法不同将实验分为7组.用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力;流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4, CD8, CD28, CD16、CD56+ CD16, CD3+ CD8+,CD3+CD4+,CD3+ CD56+,CD3+CD28+,CD45RO,颗粒酶B(granzyme B),穿孔素(Perforin)和CD107a等分子的变化和用ELISA方法检测细胞因子IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α含量;乳酸脱氢酶释放法测定诱导后的共刺激细胞对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞株的杀伤活性.
结果:在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其细胞增殖能力有明显的差异,以含刺激因子CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL15和IL-21组增殖倍数最高,在培养第10天时该组的增殖倍数为255.3±6.3,明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系组(166.6±5.5)(P＜0.05).在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其部分细胞表面标志有所差异,在培养体系中无IL-15时CD16+CD56+(NK细胞)细胞和CD3+ CD56+细胞比例明显高于其他组;CD45RO+的记忆性T细胞标记中以延迟3天添加IL-15和IL-21组最明显.在PBMC培养体系中加入不同的活化因子其细胞表分泌的细胞因子有明显差异,在含IL-15和IL-21组中IFN-γ分泌量显著高于其他组.经不同活化因子刺激培养10天的PBMC对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞杀伤活性有明显差异,以延迟3天添加IL-15和IL-21组最高(分别为76.2％、60.3％和70.6％),明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系的细胞组(分别为54.9％、44.6％和50.4％)(P＜0.05).培养的各组细胞对胃腺癌细胞SGC-7901杀伤活性最强.
结论:不同刺激因子活化的PBMC其增殖能力、表面标记、细胞因子分泌和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的刺激因子对细胞定向培养有一定意义.
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