【摘 要】
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目的:利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplificalion of cDNA ends，RACE)测定基因Ⅲ、VIb和VIId型新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)基因组两侧末端序列，并对NDV的leader和trailer进行分析。方法:利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA，再利用RT-PCR或PCR方法对病毒
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241 中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会
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目的:利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplificalion of cDNA ends，RACE)测定基因Ⅲ、VIb和VIId型新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)基因组两侧末端序列，并对NDV的leader和trailer进行分析。
方法:利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA，再利用RT-PCR或PCR方法对病毒基因组的末端进行快速的扩增。
结果:建立一套操作简单、低成本、可重复性高的RACE方法，测定了三种基因型5株NDV 3’末端leader和5’末端trailer序列比对分析
结论:本实验测定的鹅源Ⅶ型毒株JS/7/05/Ch基因组的15，184nt由一个T变为了C，5’端trailer与3’端leader的连续互补序列由8 nt变为12 nt，而其它4株基因Ⅲ型和Ⅵ型NDV均未发现该突变。通过RNA的二级结构分析，NDV基因组和反向基因组RNA的3’末端形成-个发卡结构。JS/7/05/Ch等3株NDV U→C(T→C)的突变位于发卡环上，不影响二级结构的形成，发卡环的RNA序列突变为3’-UCUC-5’，与基因组3’端发卡环的3’-UCUUA-5’相似，推测可能影响了基因组RNA的复制速度。
其他文献
运用PCR重叠延伸技术将传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位5e与VP2基因连接构建组合基因VP2-5e，将其插入到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHT中，转化E.coli DH10Bac感受态细胞，经三抗性筛选获得重组杆状病毒表达质粒pBactHT-VP2-5e，用脂质体法转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒vBacHT-VP2-5e。对vBacHT-VP2-5e感染的Sf9细胞，以间接免疫
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目的:为了解广东省目前规模化猪场H1和H3亚型猪流感病毒的流行情况，方法:我们采用ELISA的检测方法对采集于广东省14个市的28个规模化猪场的1 015份猪血清进行H1亚型和H3亚型猪流感病毒的抗体检测。结果:结果表明，H1亚型抗体总阳性率为40.9[％]，猪场阳性率高达92.9[％](26/28)；H3亚型抗体总阻性率为16.8[％]，猪场阳性率为78.6[％](22/28)。其中粤西和珠三角
对2009年广东省各地采集到的犬脑及对应唾液腺进行检测，分离到2株狂犬病病毒。测定GD01和GD02株N基因核酸序列，并对其核苷酸差异做了比较分析。病毒对相邻广西等地区序列进行比较，相似性相似性在97.9～99.4[％]之间。与疫苗株相似性在87.8～88.1[％]之间。说明狂犬病病毒流行存在明显的地域现象及存在犬只健康带毒现象。
为了分析狂犬病病毒(RABV)感染细胞后的蛋白质组变化，本试验利用不同毒力的狂犬病病毒株(SRV9、CVS-11、BD06)分别感染N2a细胞，对感染48小时后的细胞进行2-DE电泳，并和未感染N2a细胞比较，通过对差异蛋白质点的质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析和部分差异蛋白的westernblotting验证，结果发现感染48h后，不同毒力狂犬病病毒感染的N2a细胞之间共出现41个蛋白
本研究参考中国T1株序列设计两对引物，从新鲜的猪粪便中扩增戊型肝炎病毒(HEV)部分基因片段，长为1725bp，位于ORF2 205bp-1929bp，命名为HEV ORF2-A。其后根据HEV ORF2-A序列设计三对引物分别扩增HEV ORF2-A三段连续的基因片段，命名为HEV ORF2-B1、HEVORF2-B2、HEVORF2-B3，分别位于HEVORF2205bp-780bp(69 a
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