FLJ20420在人肺癌中表达及其功能研究

来源 :中国抗癌学会肺癌专业委员会第十二届全国肺癌学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xxx6192
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背景与目的:肺癌是临床上常见的恶性肿瘤,占恶性肿瘤的死亡原因的首位,以周清华、陈军教授为首的课题组在研究BAG-1的功能和肺癌的关系及调控BAG-1的基因时,应用BAG-1启动子功能最强的-353---28区的片段为探针,应用Southwestern blot杂交技术筛选了Hela eDNA文库,经过筛选超过5×106菌落后,获得了两个经过三次重复后都是阳性的克隆.等细胞系表达较高。为了探讨FLJ20420基因与肺癌的关系,同时作为本课题组前期研究结果的深入研究,本研究以阳离子脂质体为载体,瞬时转染FLJ20420--siRNA短双链片段进入人A549肺癌细胞株中沉默FLJ20420基因,应用Affymetrix HU133 p1us2.0基因芯片检测人A549肺癌细胞株中FLJ20420基因沉默后基因表达谱的变化,寻找与FLJ20420基因和/或蛋白密切相关的基因和/或蛋白,进一步分析FL.J20420基因作为与BAG-1相关的基因如何在肺癌中发挥作用的,会产生哪些级联反应,并通过生物学行为研究进一步来验证FLJ20420基因功能及其生物学效应。 方法:1.实时荧光定量PCR鉴定FLJ20420和BAG-1基因在NL9980,SHP77,95C,L9981,A549,SPCA1,LTEP-2,YTLMC-9,NCIH446,GLC82,NCIH460肺癌细胞系的表达水平,Western Blot鉴定BAG-1蛋白在NL9980,SHP77,95C,L9981,A549,SPCA-1,LTEP-2,YTLMC-9,NCIH446,GLC82,NCIH460肺癌细胞系的表达水平;2.阳离子脂质体瞬时转染FLJ20420-siRNA短双链片段进入人A549肺癌细胞株中,实时荧光定量PCR检测FLT20420基因mRNA水平的干扰效率;。 结果:1. FLT20420基因mRNA在NL9980,SHP77,95C,L9981中表达较高,在A549,SPCA-1,2,YTLMC-9,NCIH446中呈中等表达,在GLC82,NCNCIH460中表达状态较低;BAG-1基因mRNA表达较高,YTLMC-9,LTER2,SPCA-1,GLC82中表在NCIH440,A549,SHP77中呈中等度表达,在95C,L9981,NL9980中表达状态较低;BAG-1蛋白在YTLMC-9r SPCA-1.GLC82,LTEP-2.NCIH446表达较高;在SHP77,A549,NCIH460中等度表达:在NL9980,95C,L9981中表达明显较低,BAG-1在基因和蛋白水平的表达与FLJ20420基因的表达呈现负相关。 结论:本研究在国内外首次报道FLJ20420在11株人肺癌细胞细胞系中的表达水平,鉴定出FLJ20420相对高表达人肺癌细胞株NL9980, SHP77,95C,L9981,FLJ20420相对低表达人肺癌细胞株GLC82,NCIH460:BAG-1相对高表达人肺癌细胞株NCIH446,YTLMC-9,LTER2,SPCA-1,GLC82,BAG-1相对低表达人肺癌细胞株95C,L9981,NL9980;FLJ20420与BAG-1基因/蛋白在n株人肺癌细胞细胞系的表达水平呈现负相关变化。FLT20420基因被沉默后对细胞周期和细胞活力无明显影响。
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