【摘 要】
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[目的]本研究采用非标记定量蛋白质组学技术对构建的黏菌素耐药E.coli进行比较研究，从蛋白质水平探讨细菌耐药产生的蛋白谱变化，筛选出介导细菌耐药的潜在关键作用蛋白，阐明mcr-1基因介导的黏菌素耐药产生机制.[方法]本研究以E.coli SHP45基因组为模板，构建pUC19-mcr-1重组质粒，并化转入DH5α感受态细胞，成为携带mcr-1基因的工程菌M15.工程菌和敏感菌株分别在不同药物浓度
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京市食品安全与人类健康高精尖创新中心,北京,100193 中国农业大学动
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会
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[目的]本研究采用非标记定量蛋白质组学技术对构建的黏菌素耐药E.coli进行比较研究，从蛋白质水平探讨细菌耐药产生的蛋白谱变化，筛选出介导细菌耐药的潜在关键作用蛋白，阐明mcr-1基因介导的黏菌素耐药产生机制.[方法]本研究以E.coli SHP45基因组为模板，构建pUC19-mcr-1重组质粒，并化转入DH5α感受态细胞，成为携带mcr-1基因的工程菌M15.工程菌和敏感菌株分别在不同药物浓度下培养，裂解细胞后，对细菌全蛋白进行液体酶解，采用TripleTOF6600进行了全蛋白组非标记定量数据采集.
其他文献
[目的]自介导弯曲菌对酰胺醇类、林可霉素、恶唑烷酮、截短侧耳素类耐药的cfrC基因在美国首次报道以来，其他国家和地区尚未有报道。本研究旨在调查我国动物源弯曲菌中cfrC的流行及耐药情况，并分析cfrC基因的遗传背景。[方法]采用常规PCR检测2015年采集自山东、上海和广东370株鸡源、猪源弯曲菌中cfrC基因的流行情况，之后用微量琼脂稀释法测定最小抑菌浓度，并用S1-PFGE及核酸杂交进行定位，
[目的]本研究旨在分析农村后院散养猪群中产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌(ESBLE.coli)及其质粒介导多黏菌素耐药基因mcr-1的流行情况.[方法]2015年7月从山东省某乡镇12个村庄的256户散养农户中共采集417份猪粪便拭子,采用选择培养基分离ESBLE.coli,用MALDI-TOF质谱法鉴定分离株菌属.对全部ESBLE.coli采用常规PCR法检测mcr-1基因,并用琼脂稀释法测定其对
[目的]目前金黄色葡萄球菌耐药严重，耐青霉素金黄色葡萄球菌(PRSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的出现和流行己严重威胁到常用抗生素如阿莫西林(AMO)的药效，已有研究表明黄芩素(BAI)可显著加强AMO对PRSA和MRSA的抗菌活性，但其机制不明，本研究拟探索两者的协同抗菌机制，为新的复方制剂的开发提供理论依据。
抗生素的大规模、不合理的使用加速耐药细菌的扩散。低浓度抗生素的长期暴露会增强细菌的抗生素耐受性(Antibiotic tolerance)，进而促进抗生素耐药性(Antibiotic resistance)的产生。然而，抗生素耐受性产生的机制仍然不清楚。因此，[目的]本课题旨在阐明抗生素耐受机制，为细菌耐药机制研究提供新思路，为新型抗生素开发寻找新靶点。
[目的]评估我国市售益生芽孢杆菌菌株的安全性。[方法]以全国范围内销售的益生芽孢杆菌产品为研究对象，进行芽孢杆菌分离鉴定，对分离株进行毒性及耐药性的评估。毒性评估包括在基因、蛋白和细胞水平的毒素特征研究，以及在实验动物体内的毒性评价。耐药性评估包括分离株耐药谱的调查；通过全基因组测序数据分析分离株中可移动耐药基因的携带情况及其基因环境分析。
[目的]本研究旨在建立一种快速检测耐药基因blaNDM(产新德里金属β-内酰胺酶基因)的SYBR GREEN Ⅱ实时荧光定量PCR检测方法,并调查青岛地区blaNDM 基因在典型鸡场养殖环境中的污染状况.[方法]2016 年从青岛地区的9 个典型鸡养殖场采集106 份环境样品,包括38 份土壤样品、24 份堆肥样品和38 份粪便样品.建立耐药基因blaNDM 实时荧光定量PCR 检测方法,并采用该
[目的]本实验通过建立宏基因组的方法研究Eswab管样本中β-内酰胺类耐药基因并对其中的菌种多样性以及其与耐药基因的关联性进行研究。[方法]首先，每个地区每个季度选取四个养殖场，每场采集30个20日龄左右的鸡肛拭子Eswab管样品。其次，将样本混合直接提取宏基因组构建宏基因组文库并进行Illmina测序。最后将获得的测序结果通过SRST2和MetaPhlAn 2分析获得文库中包含的耐药基因和菌种的
[目的]mcr-1 基因是首次发现的质粒介导黏菌素耐药基因，本研究拟调查国内9 个省市(广州、上海、山东、四川、内蒙、安徽、重庆、湖南、山西)在2008-2014年间收集的猪源大肠杆菌中的mcr-1 基因的流行情况。[方法]将本实验室收集于2008-2014年间的所有猪源大肠杆菌接种于含2 μg/mL黏菌素的BHI培养基上筛选耐药菌株；提取耐多黏菌素菌株的基因组，通过PCR检测mcr-1 基因。
[目的]了解多重耐药肺炎克雷伯菌与不同哺乳动物细胞的相互作用关系,探讨多重耐药肺炎克雷伯氏菌在不同细胞中的生存情况.[方法：]通过细菌分离鉴定以及药敏实验得到多重耐药肺炎克雷伯菌医源临床分离株KPN5.用KPN5以感染复数(MOI)50感染非洲绿猴肾上皮细胞(Vero),大鼠小肠上皮细胞(IEC-6),人肺上皮细胞(A549)和小鼠巨噬细胞(Raw264.7),分别于细菌感染细胞后的2h、4h、6
[目的]本研究对山东省一个养鸡场及其周围环境进行碳青霉烯耐药假单胞菌流行病学研究，旨在揭示碳青霉烯耐药假单胞菌的流行现状和分子流行特征，为食品动物源耐药菌耐药基因流行的风险评估提供依据。[方法]通过假单胞菌选择性培养基(含美罗培南8mg/L+万古霉素10mg/L)从一个养鸡场的鸡群、家燕、狗和饲养员来源的粪便以及苍蝇和污水等样品筛选耐药菌，对筛选的菌株进行16S rRNA菌属鉴定和碳青霉烯耐药基因