橡胶树白粉菌启动子WY172的克隆及功能鉴定

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启动子驱使外源基因在受体中启动转录是外源基因能够表达的必要条件,其通过参与基因的转录环节来调控基因表达的水平、部位及方式。其中,诱导型启动子可以实现对目的基因的精细、可控表达,避免了对植物体过量的营养消耗,在实际生产应用中显示出了极大地开发潜力。通常,大多数丝状真菌在表达外源蛋白的量比较低,为实现外源基因的高效表达,就需要强大的启动子来驱动基因的转录,但丝状真菌启动子目前研究、应用都比较少,主要是木霉属和黑曲霉属的一些启动子。本研究基于实验室研究基础,通过对专性寄生真菌橡胶树白粉菌全基因组进行预测及与经典启动子35S、Actin1比对,得到了一个诱导型启动子WY172,它在单子叶植物和双子叶植物中均可以高度表达。本研究中通过将WY172替换pBI121中的35S启动子,构建植物表达载体pBI121-WY172,通过三亲杂交法转化农杆菌菌株,通过ATMT实现WY172驱动GUS基因在三生烟中的稳定表达,获得转基因烟草植株。对T1代转基因烟草植株进行IAA处理,后对整株进行GUS染色,结果显示,IAA处理后的转基因烟草植株显示出蓝色的阳性结果,而未经IAA处理的转基因烟草植株无蓝色,因此预测其为IAA诱导型启动子。本研究不仅可以促进橡胶树白粉菌分子致病机理的研究,也为转基因工程提供了新的工具和方法。
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