【摘 要】
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新型鸭呼肠孤病毒是一种引起鸭传染病的重要致病因子,为10节段的双链RNA病毒,目前缺乏反向遗传操作平台以研究其发病机理、宿主谱改变等。本文建立10质粒全长系统,其中引入M2
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新型鸭呼肠孤病毒是一种引起鸭传染病的重要致病因子,为10节段的双链RNA病毒,目前缺乏反向遗传操作平台以研究其发病机理、宿主谱改变等。本文建立10质粒全长系统,其中引入M2节段1189-1194位引入酶切位点HindIII(AAGCTG→AAGCTT),在脂质体介导下,与能表达T7RNA聚合酶的痘病毒共转染细胞,收集转染细胞液,在鸡胚上连续传代,获得拯救病毒。结果显示:拯救病毒经测序及分子标记验证,表明获得稳定的拯救病毒;通过细胞病变观察及蚀斑实验证实,拯救病毒能引起与亲本病毒一致的细胞病变和蚀斑形态;Western Blotting和间接免疫荧光实验表明,拯救病毒成功。体外实验研究证实我们成功构建并获得NDRV的感染性克隆,为从基因水平深入研究该病毒的致病机制及疫苗开发等提供了反向遗传操作平台。
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