【摘 要】
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为了研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂，本研究采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR，SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha，ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2，ChIL-2)的成熟肽基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基
【机 构】
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河南省动物疫病预防控制中心,河南 郑州 450008 商丘市动物疫病预防控制中心,河南 商丘 47
【出 处】
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中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会暨中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会
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为了研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂，本研究采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR，SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha，ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2，ChIL-2)的成熟肽基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-TEasy载体，将ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白中的ChIFN-α在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rGhIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2病毒(AIVH9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。结果表明：成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kDa，蛋白经纯化后纯度在96％以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性，其抗VSV和IBDV(1.08×108IU/mg，1.61×105IU/mg)活性明显高于单-rChIFN-α的抗病毒活性(4.09×105IU/mg，1.99×104IU/mg);rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。干扰素活性单位为200IU的rChIFN-α-tinker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡、减轻NDV和AIV H9N2毒株所引起的胚体出血，并能显著延长鸡胚存活时间，但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。iChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV灭活疫苗具有显著的免疫增强作用，但对NDV活疫苗具有免疫抑制作用。以上结果表明rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性，这为进一步研究以rChIFN-α-tinker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础。
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