【摘 要】
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目的 观察人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC)对肝纤维化的修复作用.方法 CCl4与植物油溶液皮下注射3周制作大鼠肝纤维化模型,分为MMP-1干预组
【机 构】
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610083 成都军区总医院消化内科
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 观察人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC)对肝纤维化的修复作用.方法 CCl4与植物油溶液皮下注射3周制作大鼠肝纤维化模型,分为MMP-1干预组、空载体对照组和模型对照组.MMP-1组体外重组腺病毒Ad-hMMP-1-增强绿色荧光蛋白(GFP)尾静脉注射转染大鼠BMSC,细胞增殖-毒性检测试剂盒CCK-8检测转染后细胞增殖情况,ELISA法检测血清MMP-1水平,记录大鼠体质量、肝脏质量,检测血清肝功能和肝纤维化指标,冰冻切片观察肝组织中GFP表达和定位,HE染色观察肝脏病理学变化,过碘酸希夫染色(PAS染色)观察肝组织糖原合成情况,胶原染色观察胶原合成情况,荧光定量PCR、Western印迹和肝组织免疫组织化学法检测MMP-1、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、AFP、白蛋白、细胞角蛋白-18(CK-18)mRNA和蛋白表达情况.结果 成功建立大鼠肝纤维化模型.体外成功将重组腺病毒Ad-hMMP-1-eGFP导人大鼠BMSC中,转染后对细胞增殖无明显影响.MMP-1转染BMSC后10周,仅在转染hMMp-1组血清中有hMMP-1表达,酶活性为1.438×10-3 mmol/(g·min)；hMMP-1组较两对照组大鼠体质量和肝脏质量显著增高(P＜0.01)；肝组织冰冻切片可见GFP标记的细胞,HE染色可见hMMP-1组肝组织平均视野下假小叶数量最少,细胞变性和脂肪变性程度也在三者中最轻；Masson染色显示hMMP-1组大鼠胶原含量显著低于两对照组(P＜0.01)；PAS染色显示hMMP-1组大鼠糖原合成能力较对照组显著增强(P＜0.01)；免疫组织化学和荧光定量PCR结果显示,hMMP-1组白蛋白、CK-18、AFP、MMP-1显著增高,而TIMP-1显著降低(P＜0.01).结论 MMP-1基因修饰后的BMSC能显著提高其对大鼠肝纤维化的修复能力,值得进一步深入探讨其临床应用价值.
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