【摘 要】
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目的 当肝脏受到不同病因影响导致肝细胞受损后,肝卵圆细胞作为肝脏的成体于细胞在肝脏再生过程中发挥核心作用.表观遗传学的DNA羟化酶TET1是催化5-甲基胞嘧啶(5-mC)去甲
【机 构】
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400042 重庆,第三军医大学大坪医院
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 当肝脏受到不同病因影响导致肝细胞受损后,肝卵圆细胞作为肝脏的成体于细胞在肝脏再生过程中发挥核心作用.表观遗传学的DNA羟化酶TET1是催化5-甲基胞嘧啶(5-mC)去甲基化生成5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)的关键因子,其在胚胎干细胞的发育过程中呈下调趋势.本研究探讨5-甲基胞嘧啶羟化酶TET1在肝脏再生卵圆细胞向肝细胞分化过程中的作用.方法 采用SD大鼠2-乙酰氨基芴灌胃联合2/3肝切除法建立肝脏再生模型,胶原酶灌注联合Percoll密度梯度离心法提取、纯化大鼠原代卵圆细胞,免疫荧光实验鉴定卵圆细胞特异性标志物OV6的表达,RT-PCR和Western印迹检测部分肝切除后不同时间(3、6、9、12和15 d)TET1 mRNA和蛋白表达变化.诱导培养WB-F344卵圆细胞向肝细胞样细胞分化(对照细胞不加任何细胞因子),倒置相差显微镜观察卵圆细胞形态变化.结果 成功建立肝再生动物模型,分离获得大鼠原代卵圆细胞,数量为1.34×105/mL.倒置显微镜下可见目的细胞呈圆球形,24 h后呈半贴壁状态.OV6细胞免疫荧光染色阳性,细胞纯度≥80％.肝再生动物模型中TET1表达早期明显升高(P＜0.01),术后第6天到达峰值,之后随着肝脏修复逐渐降低(P＜0.05).卵圆细胞在肝再生过程中的增殖变化与其一致.与对照细胞相比,卵圆细胞被诱导分化后,OV6表达降低,肝细胞特异性标记物白蛋白和AFP表达升高,TET1 mRNA和蛋白水平均显著下降(P＜0.01).结论 5-甲基胞嘧啶羟化酶TET1可能参与卵圆细胞增殖和肝再生过程.
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