【摘 要】
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本论文利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了牛支原体核酸快速检测方法.根据牛支原体特异基因UvrC设计四条LAMP引物,对反应条件进行优化后确定为58℃ 60min.该方法检测牛支原
【机 构】
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华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉430070;华中农业大学动物医学院,武汉430070华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉430070
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本论文利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了牛支原体核酸快速检测方法.根据牛支原体特异基因UvrC设计四条LAMP引物,对反应条件进行优化后确定为58℃ 60min.该方法检测牛支原体的检测灵敏度为34CFU.对临床分离到的20株牛支原体进行检测,阳性率为100％,与普通PCR结果完全一致.对51头黄牛进行了牛支原人工感染,感染前随机采集了39头牛的鼻拭子,检测全部了阴性,对51头牛感染后第6天的鼻拭子进行检测,结果LAMP、普通PCR和细菌培养法的阳性检出率分别为90％,55％和45％.另外,对20株牛支原体临床分离株的检测全部为阳性,而对无乳支原体、羊的两种支原体及牛的其它常见病原体的检测全部为阴性.说明LAMP具有很高的灵敏度与特异性.由于LAMP所需实验条件简单,只需一台温控水浴锅,同时通过颜色变化判断结果,因此,适合于基层使用,具有广泛的临床应用前景.
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