NY-ESO-1特异性TCR转导人外周血淋巴细胞及相关检测

来源 :首都医科大学2013年研究生学术论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:antonw1
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  目的:将具有肿瘤抗原NY-ESO-1特异性的T细胞受体(T Cell Receptor,TCR)转导至人外周血淋巴细胞(Peripheral Blood lymphocytes,PBLs)中,提高转导后细胞表面特异性TCR表达效率,特异性增强转导后细胞识别肿瘤抗原及分泌IFN-γ的能力,为下一步进行肿瘤杀伤实验奠定基础.方法:将实验室保存的NY-ESO-1特异性T细胞受体质粒(pCDNA3.1-ESO-TCR)体外电转入新分离的正常人PBLs中,RT-PCR法鉴定转导是否成功;通过流式细胞仪对转导后的PBLs细胞进行表型分析;用特异性NY-ESO-1b抗原肽(p157-165)刺激转导阳性的PBLs,ELISPOT法检测转导后PBLs细胞分泌IFN-γ的能力.结果:RT-PCR检测到电转后PBLs能够扩增出特异性TCR片段;流式检测结果显示电转pCDNA3.1-ESO-TCR质粒的PBLs细胞表面特异性TCR表达率高于未电转质粒的PBLs的表达率(P<0.05);经多肽刺激后,与未电转质粒的PBLs相比,电转质粒的PBLs分泌IFN-γ的斑点数明显增多(P<0.05).结论:通过体外转导的方式提高NY-ESO-1特异性TCR在PBLs表面的表达,能够特异性增强PBLs分泌IFN-γ的效率,为下一步进行肿瘤杀伤实验奠定基础.
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