【摘 要】
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目的 血小板内皮细胞粘附分子-1 (Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1,PECAM-1)是大量表达于血管内皮细胞的一种蛋白,属于免疫球蛋白超家族.研究表明PECAM-1
【机 构】
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武汉市协和医院血液科华中科技大学同济医学院附属协和医院血液内科
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目的 血小板内皮细胞粘附分子-1 (Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1,PECAM-1)是大量表达于血管内皮细胞的一种蛋白,属于免疫球蛋白超家族.研究表明PECAM-1分子的胞外段参与到各种血管功能的调控中,包括血管渗透性,血管新生以及,白细胞跨内皮运动等等,但其胞内段对内皮细胞连接完整性和渗透性的作用却还未知.因而通过CRISPR原位删除PECAM-1分子的胞内段,探讨其在维持内皮细胞连接完整性和渗透性中的作用.方法 利用常间回文重复序列丛集(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)的原位基因剪辑功能,删除永生化人脐静脉内皮细胞(iHUVECs)中PECAM-1分子的胞内段,从而得到PECAM-1-△CD.通过电子细胞基质阻抗判断(Electric Cell-substrate Impedance Sensing,ECIS)观察在静息状态时以及刺激因子作用下,胞内段对内皮细胞连接完整性和渗透性的影响.利用共聚焦显微镜检测不同形态PECAM-1在细胞表面的分布情况,transwell实验定量检测白细胞跨内皮迁移运动.结果 ECIS显示,在静息状态下,含PECAM-1-△CD的单层iHUVECs的基线电阻水平低于正常iHUVECs,表明其屏障功能弱于正常iHUVECs；用炎症因子凝血酶破坏屏障功能后,含PECAM-1-△CD的iHUVECs恢复速率低于正常iHUVECs.共聚焦显微镜显示正常PECAM-1主要分布在细胞与细胞的交界处,而PECAM-1-△CD则无法定位到细胞交界处,在细胞膜表面呈弥散分布状态.transwell实验发现,活化白细胞能够穿过表达全长PECAM-1单层内皮细胞,但却不能穿过表达PECAM-1-△CD的单层内皮细胞.结论 PECAM-1分子胞内段参与维持静息状态内皮细胞的屏障功能,对受损后屏障功能的恢复有促进作用,并且对维持内皮细胞完整性和渗透性起到重要作用,PECAM-1胞内段的缺失会抑制白细胞的跨内皮运动.
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