流感病毒是最为常见的呼吸道传染病毒,每年出现季节性流行,其中甲型流感病毒可引起全球大流行。随着禽流感H5N1造成多个国家和地区的禽类爆发疫情以及在多个国家造成人群感染并出现高死亡率现象,禽流感H5N1病毒被预测认为具有潜在造成下次全球大流行的极大可能,因此一种快速有效的适用于临床或现场检测的快速诊断方法对H5N1感染的早期诊断、治疗和控制等将非常重要。本研究选取一种可用于临床或现场调查的新型快速检测试剂盒进行评价及应用,评价其可能的应用。该试剂盒是将特异性抗H5血凝素蛋白抗体印迹于硝酸纤维素膜上形成渗滤装置,将经裂解的待检样本加入渗滤装置中,之后加入特异性抗H5血凝素酶标抗体,经显色反应等形成双抗体夹心法的DotELISA方法特异性检测H5亚型禽流感病毒。本研究利用该试剂盒分别对20株包含3个进化分支的人感染高致病性禽流感H5N1病毒分离株进行设别性检测、对上述病毒梯度稀释液进行灵敏性分析和利用临床咽拭子标本进行特异性评价,同时应用该试剂盒对相关病例的临床标本进行检测,评价其可应用性。结果显示,该试剂盒能设别3个进化分支的全部20株H5N1病毒,灵敏性为0.01-1血凝单位(HAU);针对季节性流感病毒H1N1,H3N2,B型和流感病毒阴性流感样病例咽拭子标本的检测特异性分别为100%、98.6%、97.4%和100%;对H5N1感染确诊病例临床呼吸道或组织悬液标本9份进行检测,检出率为86.42%(7/9),4份H5N1核酸检测阳性环境拭子样本检出率为50%(2/4)。A/H5DotELISA检测试剂盒能设别多个进化分支禽流感H5N1病毒,检测灵敏性在0.01-1HAU之间,有较高的特异性,能较高比例的检出感染病例。