【摘 要】
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本实验对CAV-2 E3区的Ssp I片段进行了缺失,构建了E3区部分缺失的载体pVAXΔE3.然后用Sph I+Nde I对pVCPV-VP2进行双酶切,进行凝胶电泳回收CPV VP2表达盒,并对两端进行平滑化
【机 构】
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解放军军事医学科学院军事兽医研究所(长春)
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本实验对CAV-2 E3区的Ssp I片段进行了缺失,构建了E3区部分缺失的载体pVAXΔE3.然后用Sph I+Nde I对pVCPV-VP2进行双酶切,进行凝胶电泳回收CPV VP2表达盒,并对两端进行平滑化,用Ssp I对pVAXΔE3进行酶切,将载体线性化,去磷酸化,然后将CPV VP2表达盒克隆入pVAXΔE3的E3缺失处,并筛选表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得含有CPV VP2表达盒的穿梭载体pΔECPV-VP2.再用Sal I+Nur I分别对pΔECPV-VP2和pPoly-2-CAV2进行双酶切,分别进行凝胶电泳回收目的片段,将含有CPV-VP2表达盒的Sal I+Nru I片段定向克隆入pPoly2-CAV2,获得了在E3区缺失处插入CPV VP2表达盒的重组CAV-2基因组载体pCAV-2/CPV-VP2.用Asc I+Cla I对pCAV-2/CPV-VP2进行双酶切,释放CAV-2/CPV-VP2重组基因组.将CAV-2/CPV-VP2重组基因组与去除Sal I+Nru I片段的CAV-2基因组的两个片段按摩尔比1:1:1混合,利用脂质体介导共转染DK细胞,获得了重组活病毒CAV2/CPV-VP2.
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