【摘 要】
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研究化学致癌物2,4-二硝基苯磺酸损伤人角质形成细胞HaCaT的蛋白靶标.采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,通过二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)研究角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后蛋白表达谱的变化；采用蛋白质荧光染料DeepPurple对DIGE凝胶进行后染色(post-stain)迸一步提高蛋白质斑点定位准确性；使用DeCyder定量分析软件,
【机 构】
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大连医科大学生物技术系 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室 大连116044
【出 处】
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泛环渤海地区(七省二市)生物化学与分子生物学会2010年学术交流会
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研究化学致癌物2,4-二硝基苯磺酸损伤人角质形成细胞HaCaT的蛋白靶标.采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,通过二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)研究角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后蛋白表达谱的变化；采用蛋白质荧光染料DeepPurple对DIGE凝胶进行后染色(post-stain)迸一步提高蛋白质斑点定位准确性；使用DeCyder定量分析软件,经全自动背景扣除,归一化,胶内匹配,过Cy3 /Cy2及Cy5 /Cy2的比率分析定量对照组与DNBS处理组间差异表达蛋白质斑点；通过高效液相色谱-电喷雾串联质谱技术(HPLC-nESI-MS/MS)鉴定差异蛋白,筛选DNBS影响细胞正常生理功能的蛋白标记物.结果显示,2D DIGE凝胶上凝胶上平均检测到1200多个蛋白质斑点,有7个蛋白质斑点表达差异的绝对值在50％以上,差异性显著(P值小于0.05)；中5个表达上调斑点被HPLC-nESI-MS/MS分别鉴定为人的X染色体开放阅读框26 (chromosome X open reading frame 26,Cxorf26),人辅分子伴侣23 (human Co-chaperone P23,PTGES3),钙调蛋白(calmodulin,CALM3),肌球蛋白轻链(smooth muscle and non-muscle myosin alkali light chain,MYL6)和断裂点丛集区蛋白1 (breakpoint cluster region protein 1,BANF1)；2个表达下调斑点被鉴定为延伸蛋白B (elongin B isoform alpha,TCEB2)和核糖体蛋白L23(ribosomal protein L23,RPL23).7个差异表达蛋白与皮肤角质细胞受化学致癌物质损伤直接相关,为化学致敏物诱发皮肤疾病的深入研究提供了新的蛋白靶标,并为研究相应环境条件下皮肤有效预防和防护提供了可靠的实验数据.
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