AMS(ABORTEDMICROSPORES)为甜瓜雄性不育候选基因,其编码bHLH类转录因子,且该基因缺失后会导致花粉不能正常形成,最终导致甜瓜雄性不育的发生。甜瓜雄蕊发育需要众多基因参与调控,AMS转录因子是如何调控甜瓜雄性不育的过程仍不是很清楚。选取甜瓜细胞核单隐性雄性不育株为研究材料,从甜瓜基因组数据库中查找得到甜瓜AMS基因序列,设计引物,以基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术获得目的片段。用PlantCARE和PLACE两个在线软件进行预测分析AMS基因启动子序列。通过NEBcutterV2.0在线分析所克隆基因片段可能包含的限制性酶切位点,用限制性内切酶KpnⅠ和XhoⅠ双酶切启动子序列和pAbAi载体,酶切产物纯化后转入Y1H酵母感受态细胞,即为诱饵菌株,以此筛选蛋白与基因之间的互作。以甜瓜总RNA为模板,合成cDNA。将纯化的双链cDNA和线性化的pGADT7-Rec表达载体混合,共转化诱饵酵母。转化后酵母菌液分别取稀释10、100、1000倍的菌液100μL涂布在SD/-Leu、SD/-Leu/AbA培养基上进行筛选。结果显示,AMS基因启动子有很多光响应元件,如G-box、GT1-motif等;逆境(生物逆境和非生物逆境)相关的作用元件,如G-box、ABRE等;此外该启动子序列还含有ARE(厌氧诱导相关)、CAT-box(与分生组织表达相关)、circadian(昼夜控制相关)、TCA-element(与水杨酸反应性相关)等顺式元件,这些顺式作用元件的存在表明AMS的表达可能受到光、逆境、激素、化合物质等的诱导和调节。通过克隆AMS启动子,构建酵母单杂交系统最终确定与AMS核心元件互作的15个蛋白,包括3个未知蛋白(虽然在数据库中比对为同源性较高的蛋白,但没有关于该蛋白的功能注释,酵母单杂交表明其可能与靶DNA互作,其功能有待进一步验证),2个未鉴定的蛋白,1个光合作用中钙离子结合蛋白,1个核酮糖二磷酸羧化酶小链,1个转录抑制蛋白,1个线粒体外膜蛋白孔蛋白,1个甘油–3–磷酸转运蛋白,1个细胞色素P45084A1,1个菱形蛋白质,1个非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,2个蛋白质TIC214。对酵母单杂交筛选得到的15个蛋白进行结构域的分析,筛选到基因名为LOC103496635的蛋白含有锌指motif,在所有蛋白中有转录因子活性的概率最高。说明此蛋白可以与AMS基因启动子顺式作用元件高度结合,从而编码甜瓜雄性不育基因的表达。