【摘 要】
：
采用电穿孔法将带有GFP的质粒(pGFP-NEO)转染MSCs,经过G418筛选阳性克隆,用荧光显微镜检测GFP的表达情况.结果 以电压150V,20ms一次脉冲进行转染.转染GFP质粒的MSCs能在含有G418的培养基中生长,而未转染的MSCs不断死亡.转染24h后即能观察到少量荧光细胞,一个月后大部分荧光细胞呈集落样生长,荧光表达较强,转染率为25％～30％.稳定表达的阳性克隆细胞,已稳定表达
【机 构】
：
中国农业大学动物科技学院,北京,100094;东北农业大学,哈尔滨,150030 中国农业大学动物
论文部分内容阅读
采用电穿孔法将带有GFP的质粒(pGFP-NEO)转染MSCs,经过G418筛选阳性克隆,用荧光显微镜检测GFP的表达情况.结果 以电压150V,20ms一次脉冲进行转染.转染GFP质粒的MSCs能在含有G418的培养基中生长,而未转染的MSCs不断死亡.转染24h后即能观察到少量荧光细胞,一个月后大部分荧光细胞呈集落样生长,荧光表达较强,转染率为25％～30％.稳定表达的阳性克隆细胞,已稳定表达6个月.结论 GFP基因能在MSCs中进行有效的可持续、稳定、高效表达;因此,转染GFP的MSCs能作为研究MSCs的诱导分化及生物细胞工程治疗的载体细胞.
其他文献
用PCR方法扩增并测定了三江黄牛、德昌水牛、大额牛和九龙牦牛Myf-5基因的部分序列.结果表明:所测序列包括Myf-5因(5219bp)的全部外显子2序列和内含子1、3的部分序列.通过Blast序列比较分析,三江黄牛、德昌水牛、大额牛3个牛种的Myf-5基因均在1521位点发生了A-T的转换或者颠换,与普通牛种同源性均为99.2％;而九龙牦牛Myf-5基因在除在1521位点发生了A-T的转换或者颠
随机选取九龙牦牛和麦洼牦牛,采用PCR-RFLP技术对两牦牛品种激素敏感脂肪酶(HSL)基因外显子Ⅰ部分序列进行了SmaⅠ酶切多态性分析,结果表明:九龙牦牛和麦洼牦牛HSL基因外显子Ⅰ部分片段具有SmaⅠ酶切多态性;两牦牛品种表现为AA和AB两种基因型,其中九龙牦牛AA、AB基因型频率分别为0.8387、0.1613,麦洼牦牛为0.5667和0.4333,但两牦牛品种内均未检测到BB型.九龙牦牛和
用PCR-SSCP分析方法,对共39头的草原红牛和利草杂交牛MSTN基因的第一外显子进行了多态性分析.结果表明第一外显子共存在三种基因型,分别为AA型,BB型和AB型.经测序发现在第一外显子的第282位发生1处C→A的碱基突变,导致编码的氨基酸由苯丙氨酸变为亮氨酸.统计结果表明:等位基因B的含量很低,在草原红牛、1/4血的利草杂交牛和1/2血的利草杂交牛中的含量分为0、0.115和0.269.利用
在分析研究RFLP、RAPD、VNTR、SSR、RMAPD、AFLP、PCR-SSCP、SNPs、mtDNA等各种DNA分子遗传标记的原理和优缺点基础上,讨论藏绵羊分子遗传标记及其在遗传育种中的应用现状和存在的问题,展望了今后的研究趋势和发展前景.
NRAMP1基因是与动物沙门氏菌等抗性有关的重要候选基因.本文利用PCR-RFLP技术,分析了393头猪NRAMP1基因内含子6的NdeⅠ酶切位点的多态性.结果发现皮特兰、大白猪、长白猪3个品种中其基因型频率和基因频率分布趋近一致,其等位基因A和B的频率分别为0.261/0.739,0.223/0.777和0.204/0.796.
为分析我国肉用及部分兼用型鸭品种的遗传多样性和系统发生关系,利用17个微卫星标记,采用PCR扩增,8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,对我国肉用及部分兼用型鸭品种资源的遗传多样性进行了检测,统计了各群体的等位基因组成、平均有效等位基因(Ne)、平均遗传杂合度(h).多态信息含量(PIC)、群体间的遗传距离(Ds).采用UPGMA和邻接法构建系统发生树,应用自展检验估计系统树中节点的自引导值,并进行
利用25个微卫星标记,对以隐性白羽鸡和仙居鸡为亲本建立的资源群体F2500只鸡进行遗传检测,并测定各个体的活重、屠体重、屠体率、胸肌率、腿肌率和腹脂率,采用方差分析法对标记与性状进行连锁分析.研究结果表明:各位点平均等位基因数为5,平均杂合度为0.7012,平均多态信息含量为0.6468.方差分析显示:MCW0095、ABR0322、ADL289、MCW4、ADL166、MCW104和MCW67对
通过资源调查摸清我国著名中型蛋肉兼用品种巢湖鸭的外貌特征、生产特性和适宜分布的生态环境,并发现该品种在原产地处于正常保种状态,保存利用良好.通过筛选的26个多态性较好的微卫星标记,检测了该品种的遗传多样性,结果表明26个微卫星位点均表现出多态性,总共检测到111个等位基因,平均等位基因数为4.269个;群体多态信息含量为0.488,杂合度为:0.610.说明该品种遗传多样性丰富,选择的潜力相对较大
建立SYBR实时荧光定量PCR检测AA鸡β-actin基因mRNA表达的方法,为了解AA鸡胰腺组织中功能基因的表达奠定基础.方法:以TRIzol裂解抽提法提取AA鸡胰腺组织总RNA,设计并合成鸡的β-actin基因引物,以RT-PCR法制备β-actin基因的目的片段并进行扩增和纯化回收,梯度稀释后作为标准品模板来进行实时荧光定量PCR扩增得到标准曲线,并在提取的AA鸡的胰腺组织中对β-actin
采用火焰光度法对青海省大通种牛场71头梅花鹿、18头白唇鹿和11头马鹿三项血钾指标和红细胞钾型进行了研究.结果发现:①被检青海梅花鹿、白唇鹿和马鹿的血清钾离子浓度分别为4.2、3.7和4.4 mmol/L;②全血钾离子浓度为28.3、27.4和28.9 mmol/L;③红细胞钾离子浓度分别为70.5、75.4和74.4 mmol/L;④按全血钾离子浓度或红细胞钾离子浓度判定,全部被检青海三种鹿的红