【摘 要】
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目的: 构建能够靶向抑制细胞皮层蛋白ARP2/3结合功能区的重组质粒,并将其转染入人大肠癌细胞,观察其对于肿瘤细胞侵袭作用的影响.方法: 以含有拮抗分子Cortactin全长基因的质粒为模板,PCR法扩增获得目的片段Repeat,将目的片段和荧光表达载体EGFPN2通过双酶切进行连接,转化入感受态大肠杆菌DH5 α扩增以获得重组质粒EGFP-N2/Repeat.重组质粒,空质粒分别通过脂质体介导转
【机 构】
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南通大学附属医院普外科 226001
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目的: 构建能够靶向抑制细胞皮层蛋白ARP2/3结合功能区的重组质粒,并将其转染入人大肠癌细胞,观察其对于肿瘤细胞侵袭作用的影响.方法: 以含有拮抗分子Cortactin全长基因的质粒为模板,PCR法扩增获得目的片段Repeat,将目的片段和荧光表达载体EGFPN2通过双酶切进行连接,转化入感受态大肠杆菌DH5 α扩增以获得重组质粒EGFP-N2/Repeat.重组质粒,空质粒分别通过脂质体介导转染入人大肠癌细胞Lovo和HCT-8,分别扩增培养,通过boyden小室模型观察大肠癌细胞侵袭性的改变.结果: PCR扩增获得与预期一致的DNA特异性片段,经PCR,双酶切和测序证实目的片段正确的与载体质粒连接,重组质粒经过双酶切证实构建成功.显微镜下观察重组质粒成功转染入大肠癌细胞,与对照组细胞比较,含有拮抗分子的细胞侵袭性明显下降.结论:靶向抑制皮层蛋白arp2/3结合功能区后,大肠癌细胞的侵袭性明显受到抑制,该重组质粒能够通过抑制皮层肌动蛋白装配来抑制大肠癌细胞的侵袭性。
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