稻瘟菌效应子AvrPib的表达纯化,晶体生长和结构分析

来源 :中国植物病理学会2017年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:quintentwc93
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由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是为害水稻的主要病害。稻瘟病菌在侵染过程中分泌的无毒效应蛋白会被水稻中的抗病蛋白R蛋白直接或间接识别,并激发下游的抗病反应,抑制病原菌的进一步侵染。由于无毒效应蛋白在植物与病原物互作中的关键作用,稻瘟病菌侵染水稻过程中分泌的无毒效应子研究已成为研究的热点之一。例如AvrPib是最近通过图位克隆被克隆得到稻瘟病菌的无毒基因,与抗病基因Pib符合基因对基因假说,但无毒蛋白与抗病蛋白Pib互作模式尚不明确。本研究通过解析AvrPib结构分析其功能和避免被寄主受体的识别机制,利用原核表达系统,将AvrPib基因克隆到原核表达载体中,在大肠杆菌中进行重组表达,通过亲和层析,离子交换层析和分子排阻层析等方法获得高纯度的目的蛋白,利用气相扩散法筛选不同晶体生长条件,获得目的蛋白晶体,优化后得到1.8A衍射数据,利用SAD(Single wavelength Anomalous Dispersion)求解相位,最终解析其晶体结构;与已报道的效应蛋白结构进行比对,发现具有保守的"β-sandwich"结构,同时也发现不同于其他效应子稳定二级结构的方式,解释田间分离菌株中AvrPib因关键氨基酸突变破坏自身结构稳定性而导致无毒功能丧失的结构机制,体外设计相关突变体进行验证,其他功能验证还在进行中。本研究为深入理解水稻与稻瘟病菌互分子机理提供新的线索和为培育高抗水稻品种提供重要理论基础。
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