【摘 要】
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Tet-on系统是一种高效无毒、具有严密开/关功能的基因调控系统。脂质体转染法是较为常用的将外源基因转入细胞的方法，在转染过程中，很多因素会影响脂质体的转染效率，为了尽可能提高转染率及外源基因的表达水平，试验中对转染及诱导表达条件进行了优化。结果表明：当pBI-EGFP-EGFP：pCAGGS-rtTA2s-M2为1∶2，质粒DNA：LjpofectemineTM2000为1∶2.5，转染后6h加
【机 构】
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华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070 华中农业大学动物遗传育种与繁殖
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Tet-on系统是一种高效无毒、具有严密开/关功能的基因调控系统。脂质体转染法是较为常用的将外源基因转入细胞的方法，在转染过程中，很多因素会影响脂质体的转染效率，为了尽可能提高转染率及外源基因的表达水平，试验中对转染及诱导表达条件进行了优化。结果表明：当pBI-EGFP-EGFP：pCAGGS-rtTA2s-M2为1∶2，质粒DNA：LjpofectemineTM2000为1∶2.5，转染后6h加入Dox终浓度为1μg/mL，诱导12h可获得较为满意的表达水平，转染率可达(32.0±3.1)％。Tet-on系统在鸡胚成纤维细胞中的有效转染及GFP的高效表达，为下一步在CEF中进行外源目的基因的功能研究奠定了良好的基础。
其他文献
[目的]为了对新型复方注射液进行质量控制和稳定性考察,[方法]采用HPLC-UV法检测注射液中氟尼辛葡甲胺的含量.色谱柱为Hypersil ODS2(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.1％磷酸水(80∶20)为流动相；检测波长254 nm；柱温30℃；流速1 mL/min.量取该注射液1ml,置100 ml量瓶中,精密称定,加流动相稀释并定量至刻度,摇匀,进样量为10 ml,记录色谱图
[目的]耐药性是细菌适应性进化的结果，不合理的给药方案将导致耐药菌的过快增长，为了明确给药方案在突变耐药菌产生和富增上所发挥的作用。[方法]本研究利用体外药动模型研究了恩诺沙星不同给药方案对大肠杆菌突变耐药产生和富增的影响。[结果]结果表明在药物消除半衰期和给药间隔相同的情况下，如果药物不能杀灭全部的病原菌，则给药浓度越高，耐药菌出现越早，且耐药强度越高。在药物浓度和给药间隔相同的情况下，药物消除
本文介绍了我国水禽产业基本情况，提出我国产业发展的技术要求，指出我国水禽产业技术的重点任务是解决我国水禽产业资源高效利用、保护环境、改善产品品质、实现标准化生产面临的关键技术问题。基础性工作则主要围绕水禽产业可持续发展问题建立基础性、公益性技术平台，由国家水禽产业研发中心更功能研究室和综合试验站协作完成。
本研究以太湖鹅、扬州鹅、豁眼鹅、浙东白鹅、皖西白鹅和四川白鹅6个鹅品种为实验材料，根据鸭、鹅GH基因序列设计了l对扩增第2外显子的引物，用PCR-SSCP方法进行单核苷酸多态性分析，并对不同品种进行群体遗传学分析。结果表明，在鹅GH基因第2外显子上共发现2个单碱基突变位点，第39处的T-C突变，未发生氨基酸变化，为沉默突变;第74处T-C单碱基突变导致第25个氨基酸由缬氨酸(V)变为丙氨酸(A)。
ADFP可能是调控鸡脂肪性状的候选基因。鸡脂肪性状的发育直接影响鸡的肉色、风味和嫩度等肉质性状。本实验以四川山地乌骨鸡为材料，采用PCR-SSCP分析个体基因型，应用单因素方差分析方法分析该基因突变位点对鸡的肉质性状和生长发育性能的遗传效应。结果：双倍型、SNP2和SNP3均对四川山地鸟骨鸡生长性能和肉质性状有显著或极显著的遗传效应。
肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor2，MEF2)是一种特定的转录因子，在脊椎动物中该家族包括：MEF2A，ME2B，MEF2C和MEF2D四个成员，它们对细胞增殖、分化、存活、凋亡过程中相关的基因表达进行调控。本文重点对MEF2蛋白活性调控进行综述。
本实验荧光定量PCR技术检测了MyoG基因在鸭胚胎发育第10天至出生后7天小肠组织中的表达情况，结果表明：MyoG基因在鸭胚胎形成后小肠组织中的表达呈现规律性，MyoG mRNA水平从E10d至E14d呈下降趋势，在E18d达到高峰，随后逐渐降低，且各个阶段表达水平差异显著(P<0.05)。初步推断：MyoG基因可能参与了小肠组织的发育或者调控了其功能。
本试验通过PCR-RFLP方法检测Mx基因S631N多态位点的等位基因A和G在白耳鸡群体中的分布，通过选配组建三种不同基因型群体(AA,AG，GG)，免疫后分别于35、42、49、70、100日龄采用血凝和血凝抑制方法测定不同基因型个体的禽流感(AI)和新城疫(ND)抗体滴度，分析该多态位点与免疫性状的关联。结果表明，在白耳鸡群体中Mx基因S631N多态位点的等位基因频率处于Hardy-Weinb
[目的]为探讨半抗原结构对抗体特性的影响,最终建立高灵敏度的呋喃它酮酶联免疫检测方法.[方法]首先用吗啡啉和环氧氯丙烷合成呋喃它酮代谢物5-甲基吗琳-3-氨基-2-恶哇烷酮(AMOZ),再经对醛基苯甲酸、溴丁酸乙酯、丁二酸酐等试剂将AMOZ衍生化合成四种不同结构的半抗原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、V,经活性酯化法分别与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,合成偶联比不同的8种免疫原和8种包被原.将8
[目的]沙门菌是奶牛子宫内膜炎和乳房炎的主要致病菌.沙门菌菌型繁多，分布广泛.目前已确认的沙门菌属有2500余种血清型.为了揭示奶牛源沙门菌的致病作用及致病作用机理，对内蒙古地区奶牛源沙门菌进行了分离及致病性研究.[方法]采用选择鉴别培养法从奶牛乳房炎和奶牛子宫内膜炎的460份病料中分离出致病性沙门菌38株；应用生化试验、A-F多价诊断血清凝集试验对分离的疑似沙门菌菌株进行分型和鉴定；采用腹腔注射