【摘 要】
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目的:以改进的银染RNA AP-PCR法分析原发性及转移性胃癌标本,鉴定和克隆胃癌转移相关基因.方法:以原发及转移灶胃癌标本总RNA为研究对象,首先以T12MN“锚定”引物进行逆转录
【机 构】
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厦门大学生命科学学院抗癌研究中心厦门大学生命科学学院生物学系;厦门市中山医院消化科;
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目的:以改进的银染RNA AP-PCR法分析原发性及转移性胃癌标本,鉴定和克隆胃癌转移相关基因.方法:以原发及转移灶胃癌标本总RNA为研究对象,首先以T12MN“锚定”引物进行逆转录合成cDNA第一链,再以10核苷酸任意引物进行PCR扩增,5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物后银染显示并回收差异条带,经RNA点杂交验证、克隆测序后进入GenBank数据库检验同源性.结果:经银染RNA AP-PCR法分析,获得系列差异表达片段.对其中MGA1(662bp)和PGA1(589 bp)两个片段进行验证和测序,结果显示,MGA1与胃癌转移相关,并与编码人巨噬细胞集落刺激因子受体(macrophage colony-stimulating factor receptor,CSF-1R)的原癌基因c-fmns 100%同源;而PGA1则属胃癌转移抑制基因,与编码肿瘤转移抑制基因KAI-1完全同源.结论:银染RNA AP-PCR法适用于分析和克隆差异表达基因,具有快速、直观、假阳性率低等优点;提示CSF-1R及KAI-1与胃癌转移表型相关,为进一步研究CSF-1R功能提供了新的线索.
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