全人源抗体基因库的构建及抗表皮生长因子受体单链抗体的筛选

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目的

从肿瘤患者外周血中构建全人源单链可变区抗体基因库,并采用真核核糖体展示技术高效筛选全人源抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单链抗体。

方法

采用PCR技术从52例晚期肿瘤患者外周血中构建大容量的全人源抗体基因库。针对EGFR抗原靶标,应用真核核糖体展示技术对该基因库进行高效富集筛选。通过大肠埃希菌表达体系对回收的基因库进行克隆、表达,并鉴定抗体活性。

结果

构建的全人源抗体基因库库容估算为4.3×1013分子。对该基因库进行3轮富集筛选后,获得EGFR富集的单链抗体基因库。对回收基因库进行克隆、表达,并随机鉴定了49个克隆,获得结合力为10-8~10-7 mol/L的2株全人源抗EGFR单链抗体。

结论

利用肿瘤患者外周血,结合核糖体展示技术可以较快获得具有医用价值的全人源单链抗体。

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