【摘 要】
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选取马动脉炎病毒(EAV)基因组中高度保守的开放阅读框7(ORF7)序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测EAV.使用含有选定检测序列的克隆标准
【机 构】
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青岛出入境检验检疫局,南京农业大学,沈阳农业大学
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选取马动脉炎病毒(EAV)基因组中高度保守的开放阅读框7(ORF7)序列,设计了特异性引物和TaqMan探针,利用一步法的实时定量RT-PCR来定量检测EAV.使用含有选定检测序列的克隆标准品做标准曲线,证明该方法可以检测出含有5(4.77)个RNA分子,即可从组织培养液(TCF)中检出一般含有5 PFU/μL病毒拷贝.对猪生殖呼吸道综合征病毒、马疱疹病毒无交叉反应,特异性好.用疫苗用种毒(Bucyrus标准株)肌肉注射于马驹后,定量RT-PCR比病毒分离试验更能灵敏地检出呼吸道排出的病毒.对456份临床鼻腔分泌物样品检测,定量RT-PCR检出6份阳性,而病毒分离只检出2份阳性.一步法实时定量RT-PCR检测样品中的EAV,在快捷、准确、方便和高通量方面优于细胞培养病毒分离的检测方法,可以作为检测马病毒性动脉炎(EVA)病毒的快速方法.
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