探讨四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌转移、上皮间变的关系及其机制。
方法利用前期构建的TSPAN8 shRNAs慢病毒质粒并筛选稳转细胞株MHCC97-H-LV-GFP-shRNA-Tspan8，沉默Tspan8基因表达。WST法检测细胞增殖变化；蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶12表达改变；应用Transwell检测细胞侵袭能力变化；5.0×106肝癌细胞肝内注射行体内实验，检测肿瘤生长及肺转移情况。在层黏蛋白-5(laminin-5)作用于肝癌细胞株MHCC97-H-Mock和MHCC97-H-shRNA-Tspan8两天后，观察2组细胞形态差异，是否发生EMT改变并检测上皮及间质分子标志物。进一步应用免疫共沉淀和荧光分析Tspan8可否与整合素α6形成复合物。
结果体内外实验显示，与Tspan8-RNA干扰的MHCC-97H细胞(MHCC97-H-shRNA-Tspan8)比较，Tspan8高表达的肝癌细胞MHCC-97H和对照组MHCC97-H-Mock(LV-GFP)增殖侵袭能力、成瘤生长及肝癌肺转移等方面明显增强(P<0.05)。MHCC97-H-shRNA-Tspan8细胞中MMP-12表达抑制明显，细胞侵袭能力明显下降。进一步的研究显示：在层黏蛋白-5的诱导下四跨膜蛋白Tspan8可与α6结合并诱导高表达肝癌细胞MHCC97-H发生上皮间质转化，而在RNA干扰组肝癌细胞中(MHCC97-H-shRNA-Tspan8)未见发生；免疫共沉淀显示Tspan8可与α6结合形成复合物，提示Tspan8偶联α6后形成复合物并可促进肝癌侵袭转移。
结论四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌侵袭转移正相关，并可能与整合素α6结合而诱导肝癌细胞发生上皮间质转化有关，是肝癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。