【摘 要】
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酰基糖酰基转移酶（Acylsugar acyltransferases，ASAT）可以转移酰基到蔗糖羟基骨架上，形成蔗糖酯。目前已报道的ASAT酶包括番茄、矮牵牛、美人襟以及烟草等。尽管上述植被中的ASAT酶基因已经被报道，并证明其具有一定功能，然而关于其蛋白质的稳定性、表达及纯化情况等未见有详细报道。首先利用生物信息学软件对烟草NtASAT1的理化性质、二级结构及其同源性进行分析，并在此基础之上
【基金项目】
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2021年度河南省重点研发与推广专项（科技攻关）（202102310869）；
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酰基糖酰基转移酶（Acylsugar acyltransferases，ASAT）可以转移酰基到蔗糖羟基骨架上，形成蔗糖酯。目前已报道的ASAT酶包括番茄、矮牵牛、美人襟以及烟草等。尽管上述植被中的ASAT酶基因已经被报道，并证明其具有一定功能，然而关于其蛋白质的稳定性、表达及纯化情况等未见有详细报道。首先利用生物信息学软件对烟草NtASAT1的理化性质、二级结构及其同源性进行分析，并在此基础之上从烟草腺毛的cDNA中克隆NtASAT1基因的完整序列，将其构建至表达载体，研究其在BL21（DE3）中的表达及后续纯化条件。实验结果表明，C端截短93个氨基酸之后的NtASAT1能够在BL21（DE3）中表达，然而表达后的蛋白质大部分以不可溶状态存在于细胞中。实验进一步利用镍柱对其进行纯化，并加入底物进行酶反应，利用液相色谱-质谱法（Liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）验证所纯化酶具有一定活性。实验为ASAT酶的纯化等进一步应用奠定基础。
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