【摘 要】
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目的 构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)基因的重组腺病毒载体.方法 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库中扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段.将扩增的T
【机 构】
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青岛大学医学院附属医院神经外科,青岛大学医学院附属医院中心实验室
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目的 构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)基因的重组腺病毒载体.方法 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库中扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段.将扩增的TRAIL插入含有分泌性信号肽IL-2的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-IL-2中,将其命名为pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL.pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL经Pme Ⅰ线性化后,电转化入转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAd-sTRAIL.经HEK293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-sTRAIL,氯化铯密度梯度离心纯化AdsTRAIL病毒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法和免疫荧光技术分别检测目的基因的表达.结果 纯化后的Ad-TRAIL病毒滴度为3.12×1015 pfu/L.经RT-PCR扩增出长104 bp的基因片段.免疫荧光检测到了目的基因在U251细胞的高效表达.结论 成功构建了重组分泌型TRAIL腺病毒载体,为下一步应用于脑肿瘤的基因治疗打下了基础.
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