【摘 要】
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目的 研究T细胞调节蛋白(ITFG1)与干扰素受体超家族成员14(TNFRSF14)之间的直接相互作用,及其在小鼠实验型脑型疟发病过程中对炎症因子表达水平的作用.方法 本次实验分别构建
【机 构】
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空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室,陕西西安710032;空军军医大学基础医学院学员一大队,陕西西安710032
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目的 研究T细胞调节蛋白(ITFG1)与干扰素受体超家族成员14(TNFRSF14)之间的直接相互作用,及其在小鼠实验型脑型疟发病过程中对炎症因子表达水平的作用.方法 本次实验分别构建了ITFG1胞外段和TNFRSF14胞外段的真核表达载体pcDNA3.1-HisA-ITFG1和pFlag-CMV4-TNFRSF14,共转染293A细胞表达ITFG1-His和TNFRSF14-Flag融合蛋白,通过免疫共沉淀(Co-IP)实验验证ITFG1和TNFRSF14之间的直接相互作用;此外,通过腹腔注射伯氏疟原虫ANKA株(PbANKA)感染C57BL/6小鼠建立脑型疟模型,分别在感染3d和5d后,通过Real-Time检测小鼠脑组织和脾脏ITFG1、TNFRSF14和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达水平,对数据进行Studentt检验分析研究其相关性.结果 成功构建ITFG1胞外段和TNFRSF14胞外段真核表达载体并成功表达ITFG 1-His和TNFRSF 14-Flag融合蛋白,通过Co-IP验证ITFG1和TNFRSF14之间存在直接的相互作用,并在脑型疟小鼠感染模型中发现,PbANKA感染5d后,脑组织持续高表达ITFG1,同时TNFRSF14和TNF-α的mRNA表达水平也明显升高;而在脾脏组织ITFG1表达量明显降低,同时TN FRSF 14和TNF-α的mRNA表达水平也明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ITFG1和TNFRSF14之间存在直接的相互作用,而且在脑型疟感染过程中其mRNA表达水平与炎症因子TNF-α的表达量之间存在正相关性,说明ITFG1可能通过TNFRSF14上调脑型疟发病过程中的炎症反应,从而对脑组织造成一定程度的免疫病理损伤.
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