【摘 要】
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研究了冷冻保护液、平衡时间、降温速度、解冻液以及解冻方式对冷冻小鼠胎儿成纤维细胞和牛睾丸成纤维细胞活力的影响.结果表明,对小鼠胎儿成纤维细胞和犊牛睾丸成纤维细胞进
【机 构】
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西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室
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研究了冷冻保护液、平衡时间、降温速度、解冻液以及解冻方式对冷冻小鼠胎儿成纤维细胞和牛睾丸成纤维细胞活力的影响.结果表明,对小鼠胎儿成纤维细胞和犊牛睾丸成纤维细胞进行冷冻,冷冻液Ⅱ(0.4%BSA)+1.5 mol/L乙二醇+0.1 mol/L蔗糖的PBS液)的冷冻效果优于冷冻液Ⅰ(10%的NBS+10%DMSO的DMEM液).用冷冻液Ⅱ对小鼠胎儿成纤维细胞和犊牛睾丸成纤维细胞进行冷冻,平衡时间可从2.5 h缩短到0.5 h;冷冻细管降温速度(-6.8~-37℃)可以从0.6 ℃/min提高到1.2 ℃/min;诱发结晶可以省略.3种解冻液解冻细胞活力排序为:解冻液Ⅱ(0.4%BSA+0.1 mol/L蔗糖的PBS)>解冻液Ⅲ(10%NBS的DMEM)>解冻液Ⅰ(PBS).用冷冻液Ⅱ对MEF和BTF细胞冷冻过程中,无需用培养液制备细胞悬液反复离心.
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