【摘 要】
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目的 原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性.方法 采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原
【机 构】
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长春生物制品研究所,吉林长春,130012河南省肿瘤医院输血科,河南郑州,450003;长春百克生物科技股份公司,吉林长春,130012;
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目的 原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性.方法 采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E coli BL21(DE3),挑取阳性克隆,扩增后经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导,表达产物经12％ SDS-PAGE及Western blot鉴定.将鉴定正确的重组蛋白采用镍柱亲和法纯化,铝佐剂吸附后,经小鼠左侧腹腔注射,0.5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49d,经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法测定小鼠血清抗体水平.结果 经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-TBEV E构建正确.表达产物相对分子质量约55 000,主要以包涵体形式表达,表达量约22.3％,且可与小鼠抗TBEV血清发生特异反应,纯化后纯度达90％.末次免疫后21d,小鼠血清抗体效价达最高,为1∶6 400.结论 经原核表达系统成功表达并纯化了TBEV E蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,本实验为TBEV诊断制剂及基因工程疫苗的研发奠定了基础.
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