慢病毒介导的稳定沉默MyD88基因的胰腺导管细胞株的建立

来源 :四川大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:bin52833093
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目的建立稳定沉默髓样分化因子88基因(MyD88)的大鼠胰腺导管细胞株ARIP。方法设计并构建编码MyD88 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并用三质粒包装系统包装成慢病毒,分别命名为Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2。将ARIP分为未处理组、Lenti-Non Target阴性对照组、Lenti-shMyD88-1组和Lenti-shMyD88-2组。并用相应的病毒转导(未处理组只换液)。经流式分选和抗生素筛选结合的方法筛选绿色荧光蛋白阳性细胞,测定细胞的转导效率并用real-ti me PCR方法测定沉默效率。结果成功构建了编码表达MyD88的shRNA表达质粒。经流式分选和抗生素筛选后,慢病毒转导效率均达到100%。与未处理组相比,Lenti-shMyD88-1和Lenti-shMyD88-2对MyD88 mRNA的沉默效率分别为82.73%±1.203%和75.56%±1.176%。结论建立了MyD88基因稳定沉默的胰腺导管细胞株。为探讨MyD88基因与急性胰腺炎的相关性提供了一个全新的、稳定的、可操作的细胞模型。
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