水稻第12染色体微分离及LA-PCR扩增

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首次以粳稻第12号三体为材料,采用玻璃针染色体微分离法,成功地分离到了水稻第12号染色体。将分离到的染色体转入0.5ml装有蛋白酶K的Eppendorf管中,经酶解及Sau3A酶切后在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头,经两次PCR扩增,得到300~1000bp的染色体DNA片段。Southern杂交表明,这些染色体扩增片段与水稻基因组DNA之间有同源性,从而证明成功地扩增了分离的特定目标染色体。本文结果为分离及体外扩增水稻特定目标染色体找到一条有效的途径 For the first time, the twelfth chromosome of japonica rice was successfully isolated from rice trisomy 12 by glass needle microdissection. The isolated chromosomes were transferred into 0.5 ml Eppendorf tubes containing proteinase K, and Sau3A artificial linker was added to both ends of the chromosomal DNA fragments after enzymatic digestion and Sau3A digestion. After two PCR amplifications, 300-1000 bp Chromosomal DNA fragments. Southern hybridization showed that there was homology between these amplified fragments and rice genomic DNA, demonstrating the successful amplification of isolated specific target chromosomes. The results of this article find an effective way to separate and in vitro amplification of specific target chromosomes in rice
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