【摘 要】
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为研究建立加工番茄‘新番72号’的CRISPR-Cas9基因编辑系统。通过对番茄全基因组序列扫描，从 SlACS2基因上游编码区筛选出高特异性sgRNA,利用CRISPR-Cas9系统对 SlACS2基因进行定点突变使其失活，使系统Ⅰ乙烯正常表达以保证植株正常生长，又适度抑制系统Ⅱ乙烯生成，迟滞果实过熟软化，提高耐贮运性能。结果表明：在第1外显子的sgRNA中，位于外显子132～154 nt的sg
【机 构】
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新疆生产建设兵团第六师农业科学研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金（31760571）； 新疆兵团强青科技创新人才计划（2021CB037）～～；
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为研究建立加工番茄‘新番72号’的CRISPR-Cas9基因编辑系统。通过对番茄全基因组序列扫描，从 SlACS2基因上游编码区筛选出高特异性sgRNA,利用CRISPR-Cas9系统对 SlACS2基因进行定点突变使其失活，使系统Ⅰ乙烯正常表达以保证植株正常生长，又适度抑制系统Ⅱ乙烯生成，迟滞果实过熟软化，提高耐贮运性能。结果表明：在第1外显子的sgRNA中，位于外显子132～154 nt的sgRNA1-14特异性最好，GC含量较高，靶向特异性综合得分也较高，可为优选sgRNA。第2外显子没有合适的sgRNA可选择。试验共完成394份植株的测序工作，从中筛选出无T-DNA的突变株6个，根据测序结果明确了不同植株的突变类型，其中357个植株发生突变，突变率为90.6%,纯合突变率为36.8%。这一技术较杂交育种周期短，较诱变育种定向性好，较常规基因工程安全性高，将为番茄的遗传改良研究建立一个高效安全的技术体系。
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