【摘 要】
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目的 探讨miR-129-5p(microRNA-129-5p)对腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化(EMT)的调节作用及可能的分子机制.方法 通过新开管腹膜透析(PD)和PD 6个月以上两组患者腹透流出液分
【机 构】
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中南大学湘雅二医院肾内科 中南大学肾脏病研究所,长沙,410011
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目的 探讨miR-129-5p(microRNA-129-5p)对腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化(EMT)的调节作用及可能的分子机制.方法 通过新开管腹膜透析(PD)和PD 6个月以上两组患者腹透流出液分离培养腹膜间皮细胞,采用Taqman探针实时荧光定量PCR法检测其中miR-129-5p的表达差异.5μg/L TGF-β1刺激腹膜间皮细胞株(HPMCs)0～72 h,观察TGF-β1对HPMCs细胞miR-129-5p表达的影响;预转染miR-129-5p前体(pre-miR-129-5p)使HPMCs中miR-129-5p过表达,再给予5μg/L TGF-β1刺激48 h,采用实时荧光定量PCR、Western印迹和细胞免疫荧光等方法,观察过表达miR-129-5p对TGF-β1诱导的HPMCs EMT相关蛋白和基因表达的影响.同时,观察5 μg/L TGF-β1作用不同时间(0～ 72 h)对HPMCsSmad作用蛋白1(SIP1,miR-129-5p生物预测下游因子)表达的影响以及过表达miR-129-5p对其mRNA和蛋白水平的调节作用.结果 PD 6个月以上组患者透出液分离培养的腹膜间皮细胞中miR-129-5p的表达显著低于新开管组(P＜0.01);5μg/L外源性TGF-β1刺激,可使HPMCs的miR-129-5p表达明显降低,呈时间依赖性,pre-miR-129-5p预转染可明显恢复TGF-β1诱导的上皮标志物E-cadherin mRNA和蛋白的表达,并抑制TGF-β1引起的间充质标志物Vimentin mRNA和蛋白的高表达(均P＜0.01).另外,TGF-β1可呈时间依赖性增加SIP1的mRNA和蛋白表达(均P＜0.01),而pre-miR-129-5p可明显抑制TGF-β1诱导的SIP1蛋白表达(P＜0.01),对其mRNA表达无明显影响(P＞0.05).结论 miR-129-5p可能参与PD状态下腹膜间皮细胞EMT,并可能通过转录后调控SIP1参与该过程,以miR-129-5p/SIP1为靶点,可望为PD腹膜纤维化防治提供一种新途径.
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