利用制备血液制品中滤除的白细胞，体外诱导扩增自然杀伤细胞(NK)，并对NK细胞的分离培养方法进行优化。
方法收集15例健康献血者的新鲜外周血，将制备血液制品中滤除的白细胞回收，经密度梯度离心法获得外周血单个核细胞(PBMCs)，每份样本分为CD3mAb组(包被CD3单克隆抗体)、CD16mAb组(包被CD16单克隆抗体)和CD16mAb＋CD3mAb组(包被CD16单克隆抗体和CD3单克隆抗体)。相同培养条件下，加入相同无血清细胞培养液和细胞因子培养、诱导扩增。在显微镜下观察细胞扩增倍数，采用流式细胞术检测细胞表型CD3－CD56＋细胞比例、NK细胞表面活化性受体的表达及细胞杀伤因子干扰素γ(IFN－γ)的分泌，采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法及流式细胞术检测NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用。
结果培养第17天，CD3mAb组、CD16mAb组和CD16mAb＋CD3mAb组的CD3－CD56＋细胞比例分别为(15.19±12.22)%、(83.63±10.63)%和(49.40±12.64)%，而培养前CD3－CD56＋细胞比例为(16.34±10.51)%。CD16mAb组和CD16mAb＋CD3mAb组CD3－CD56＋细胞比例与CD3mAb组CD3－CD56＋细胞比例比较，差异有统计学意义(P<0.05)。CD3mAb组、CD16mAb组和CD16mAb＋CD3mAb组的NK细胞总数均>109个。流式细胞术检测结果显示，CD16mAb组培养前CD3－CD56＋细胞表面活化性受体CD314、CD335、CD337的表达率分别为(68.59±5.01)%、(20.94±3.48)%和(33.27±6.27)%，培养第17天分别为(73.63±4.50)%、(57.53±4.77)%和(64.65±4.18)%，培养前后CD314表达率的差异无统计学意义(P>0.05)，培养前后CD335、CD337表达率的差异有统计学意义(P<0.05)。扩增后的NK细胞对肿瘤细胞K562的细胞毒作用在效靶比为40∶1时可达到(76.97±3.16)%。
结论滤除的白细胞经体外分离培养后可得到比例高达90%的NK细胞，其细胞总数>109个，细胞活性增强，对肿瘤细胞具有较高的杀伤活性，可达到临床治疗肿瘤的应用标准。