【摘 要】
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目的 利用shRNA干扰技术抑制恶性脑胶质瘤细胞TGFβ2/Smads通路中Smad2/3基因的表达,探讨其在恶性胶质瘤细胞增殖中的作用.方法 将表达Smad2/3 shRNA干扰序列的特异性质粒及阴性对照质粒用脂质体转染法,分别转入到恶性脑胶质瘤细胞U251中.应用Real-TimePCR和Western blot法分别检测细胞中Smad2/3基因mRNA和蛋白的表达;转染后的细胞经TGFβ2(
【机 构】
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100050首都医科大学北京市神经外科研究所,首都医科大学附属北京天坛医院神经外科,100050首都医科大学北京市神经外科研究所,首都医科大学附属北京天坛医院神经外科,100050首都医科大学北京市神
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目的 利用shRNA干扰技术抑制恶性脑胶质瘤细胞TGFβ2/Smads通路中Smad2/3基因的表达,探讨其在恶性胶质瘤细胞增殖中的作用.方法 将表达Smad2/3 shRNA干扰序列的特异性质粒及阴性对照质粒用脂质体转染法,分别转入到恶性脑胶质瘤细胞U251中.应用Real-TimePCR和Western blot法分别检测细胞中Smad2/3基因mRNA和蛋白的表达;转染后的细胞经TGFβ2(+/-)处理,采用CCK-8法评价两组的增殖率.结果 (1)两种特异性质粒能够分别下调细胞中Smad2/3基因的表达(P=0.01);(2)Smad2/3的表达量在Smad3/2表达下调组中明显高于对照组(P =0.018,P=0.008);(3)Smad2/3表达下调组的细胞增值率明显高于对照组(P=0.001);(4)Smad3表达下调的细胞,在TGFβ2(+/-)处理的两组中增殖率差异无统计学意义(P=0.258).结论 在恶性胶质瘤细胞U251中,Smad2/3基因表达的下调能促进细胞的增殖,而TGFβ2介导的细胞增殖依赖于TGFβ2/Smad3通路;同时Smad2/3基因的表达下调增强了Smad3/2基因的表达。
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